مقايسه بيان RNA هاي غير كدكننده بلند GAS5 و NEAT1 در مبتلايان به سرطان سينه و افراد سالم

Comparison of GAS5 Long non-coding RNA Expression and NEAT1 in Breast Cancer Patients and Healthy People

زمینه و هدف: سرطان سینه 10 درصد از كل سرطان‌های موجود در دنیا را شامل می‌گردد و از زنان مبتلا به انواع سرطان‌ها 30 درصد مبتلا به سرطان سینه هستند. RNAهای غیركدكننده بلند(lncRNA)، گروه جدیدی از ژن‌های شناخته شده در ژنوم انسان هستند كه از بخش وسیعی از ژنوم یوكاریوت‌ها رونویسی شده و در تنظیم فرآیندهای متنوع زیستی نقش‌های مهمی ایفا می‌كنند. هدف از این مطالعه مقایسه میزان بیان lncRNAهای GAS5 و NEAT1 درنمونه‌های توموری و نرمال افراد مبتلا به سرطان سینه به روش    RT-qPCR بود. روش بررسی: در این مطالعه مورد شاهد از بافت توموری 40 فرد مبتلا به سرطان سینه و هم‌چنین 40 نمونه بافت غیر توموری از همان افراد تحت نظارت مستقیم متخصص پاتولوژیست و با توجه به علایم بالینی و یافته‌های آزمایشگاهی از بیمارستان شهید فقیهی شیراز جمع‌آوری شدند. پس از استخراج RNA از بافت‌های توموری و نرمال، ساخت cDNA طبق پروتوكل و روش RT-qPCR به وسیلهSYBR®Premix Ex TaqTM II kit   انجام شد. سطح بیان lncRNA ژن‌های GAS5 و NEAT1 با استفاده از روش ΔΔCT محاسبه گردید. داده‌ها با استفاده از آزمون تی تجزیه و تحلیل شدند. یافته‌ها: نتایج ارزیابی‌های Real Time Reverse transcription-PCR نشان داد میانگین میزان بیان نسبی lncRNA از ژن GAS5 در نمونه‌های توموری نسبت به نرمال، كاهش بیان، و میانگین میزان بیان نسبی lncRNA  از ژن NEAT1 در نمونه‌های توموری نسبت به نرمال افزایش بیان دارد. این تغییرات بیان درباره lncRNA  از ژن مربوط به GAS5 حدود 5/1 برابر و برایlncRNA  از ژن NEAT1 در حدود 2 برابر مشاهده گردید. نتیجه‌گیری: با توجه به این كه ای دوlncRNA  ی انتخاب شده به عنوان ژن مهار كننده تومور در سرطان سینه بیان آنها نسبت به سلول‌های اپیتلیوم نرمال سینه به طور معنی‌داری تغییر می‌یابد، پتانسیل این lncRNA ها به عنوان بیوماركر برای تشخیص بیماری بالا می‌رود. هم‌چنین تغییرات بیان این lncRNA‌ها در بیماران با نژادهای مختلف و ساب تایپ‌های متفاوت سرطان سینه، اهمیت استفاده از این مولكول‌ها را به عنوان بیوماركر برای تشخیص و پیش آگهی بیماری تشدید می‌كند.  

Background & aim: Breast cancer entails 10% of all cancers in the world.  Among all types of cancers, 30 percent of women are infected with breast cancer. Non-coding of long RNA (lncRNA) is a new group of known genes in the human genome transcribed from large parts of the genome of eukaryotes and play an important role in the regulation of different biological processes. The aim of the present study was to compare the expression level of GAS5 lncRNA and NEAT1  in normal and neoplastic samples from breast cancer patients by RT-qPCR. Methods: In the present case-control study, 40 samples from patients with breast cancer tumor and 40 patients from non-tumor under the direct supervision of a pathologist specialist due to clinical presentation and laboratory findings were collected. After extracting DNA from normal and tumor tissues, cDNA synthesis method according to the protocol and RT-qPCR was performed by SYBR®Premix Ex TaqTM II kit.  LncRNA expression levels of genes GAS5 and NEAT1 was calculated using ΔΔCT. Data were analyzed using t-test. Results: The results of Real Time Reverse transcription-PCR indicated that partial expression levels of GAS5 lncRNA gene in tumor samples compared to normal GAS5 lncRNA of the gene, decreasing the expression, and the mean relative expression levels of lncRNA and NEAT1 gene in tumor samples compared to normal was overexpressed. These variation gene expression of LncRNA related to GAS5 about 1.5 times and 2 times to  lncRNA from  NEAT1 gene was observed respectively. Conclusion: Due to the previous reports, these lncRNAs act as tumor suppressor in breast cancer and had differential expression in tumor and normal tissues, which could be used as biomarker for cancer diagnosis. Moreover, expression of these lncRNAs in different breast cancer subtypes and patient with other blood raises the importance of this molecules as a biomarker for cancer diagnosis and prognosis.