چند شكلي ژن پروتيين پرايون(PrP) با استفاده از تكنيك PCR-SSCP و تعيين توالي مستقيم در گوسفندان نژاد ايراني قزل، هركي و ماكويي

Prion Protein Gene (Prp) Polymorphism in Iranian Ghezel, Harki and Makoei Sheep Breeds Using PCR-SSCP Technique and Sequencing

اسكراپي يا بيماري انسفالوپاتي هاي اسفنجي شكل قابل انتقال (TSE) يك بيماري عفوني كشنده گوسفند و بز است كه روي سيستم عصبي مركزي حيوان تاثير مي گذارد. در اين پژوهش، از 300 راس گوسفند نژاد بومي قزل، ماكويي و هركي نمونه هاي خون جمع آوري و با استفاده از يك جفت پرايمر اختصاصي يك قطعه 173 جفت بازي از اگزون سه ژن پروتيين پرايون تكثير شد. با استفاده از تكنيك PCR-SSCP الگوي باندي براي هر يك از نمونه ها در جمعيت مورد مطالعه شناسايي و بعد از توالي يابي چند شكلي هاي مشاهده شده در كدون هاي 136، 154 و 171 آناليز و مقايسه آن بين نژادهاي مختلف انجام گرفت. در اين مطالعه دو هاپلوتايپ ARR و ARQ شناسايي شد كه بيشترين فراواني مربوط به هاپلوتايپ حساس به اسكراپي (ARQ) بود. بيش از 98 درصد نمونه ها با داشتن ژنوتيپ ARQ/ARQ در دسته گوسفندان با مقاومت پايين نسبت به اين بيماري قرار گرفتند. سه چند شكلي جديد L178, E147و L173براي اولين بار در جهان در اين مطالعه مشاهده شد. مقايسه فراواني هاپلو ژنوتيپي بين نژاد هاي ماكويي- قزل و ماكويي- هركي از نظر آماري معني دار بود (05/0P < ). اطلاعات بدست آمده در اين پژوهش شايد بتواند براي برنامه هاي اصلاحي جهت كنترل اين بيماري در جمعيت گوسفندان ايران موثر باشد.

Scrapie or transmissible spongiform encephalopathy (TSE), is an infectious fatal disease of sheep and goats which affects the central nervous system. In the present study, 300 blood samples were collected from three breeds of Iranian indigenous Ghezel, Harki and Makoei sheep breeds. A DNA fragment with the length of 173 bp from exon 3 of PrP gene was amplified with specific primer pairs. The banding pattern of each sample in the study population was identified by means of PCR-SSCP. Then, after sequencing, comparison and analysis of the observed polymorphism between different breeds were performed at codons: 136, 154 and 171. In the present study, tow haplotypes of ARR and ARQ were identified and the wild type scrapie-susceptible ARQ was the most frequent haplotype. In this study more than 98% of animals were with the genotype ARQ/ARQ which was classified as low resistance to this disease. Three novel alleles (L178, E147 and L173) were observed for the first time in this study. The comparison of genotype frequency between Makoei-Ghezel and Makoei-Harki sheep breeds were statistically significant (P < 0.05).The data from the current study may help to establish a breeding program for controlling of scrapie in Iranian sheep population.