سطح سيتوكراتين 18، فعاليت آنزيم پاراكسوناز و پروفايل ليپيدي در بيماران كبد چرب غيرالكلي در ايران

SERUM CYTOKERATIN-18 FRAGMENT LEVELS, PARAOXONASE ACTIVITY AND LIPID PROFILE OF NON-ALCOHOLIC FATTY LIVER IN IRAN

مقدمه: بیماری كبد چرب غیرالكلی(NAFLD) به‌عنوان یك بیماری رو به افزایش در بزرگسالان و كودكان در جهان مطرح است. چاقی، مقاومت به انسولین و هیپرتری‌گلیسیریدمی نقش اصلی در همه‌گیری این بیماری ایفا می‌كنند. NAFLD در افرادی‌كه الكل مصرف نمی‌كنند می‌تواند به‌صورت استئاتوز ساده شروع شده تا استئاتوهپاتیت، فیبروز و سیروز پیشرفت نماید. سیتوكراتین 18 (CK-18) اصلی‌ترین رشته پروتیئنی متوسط در كبد است. در آسیب سلول‌های كبدی و مرگ سلولی در طی آپوپتوز، رشته‌های CK-18 در اثر تاثیر كاسپاز‌ها در جریان خون آزاد می‌شود. یكی از این روش‌های غیرتهاجمی تشخیص، بیوماركرهای جدیدی هستند كه از بین آن‌ها CK18 اخیراً به‌عنوان یك ماركر آپوپتوزی و بسیار امیدواركننده مطرح است. نشان داده ‌شده در مبتلایان به NAFLD، افزایش استرس اكسیداتیو ممكن است به استئاتوهپاتیت غیرالكلی (NASH) منجر شود. فعالیت آنزیم پاراكسوناز ((PON1 می‌تواند برای بررسی پراكسیداسیون لیپیدی و پیگیری بیماران مبتلا به NAFLD در نظر گرفته شود. هدف پژوهش حاضر، بررسی سطح CK-18 به‌عنوان یك ماركر آپوپتوز سلول‌های كبدی و آنزیم پاراكسوناز به‌عنوان یك ماركر پراكسیداسیون لیپیدی بوده است. ­ این یك مطالعه شاهدار تصادفی است كه سطح CK-18، آنزیم پاراكسوناز و پروفایل لیپیدی در 51 بیمار مبتلا به NAFLD بررسی شده با سونوگرافی، در مقابل 30 فرد سالم اندازه‌گیری شده است. قطعه M30 با روش الایزا ساندویچ برای تعیین سطوح در گردش اشكال مختلف از CK-18 و به‌عنوان بیوماركر جایگزین مرگ سلول پیشنهادشده است. آنتی‌بادی جهت تشخیص M30، یك اپی‌توپ جدید در موقعیت 387-396 از CK18، به‌اصطلاح CK18-Asp396 را شناسایی می‌كند كه تنها پس از برش پروتئین توسط كاسپاز آشكار می‌شود و به‌عنوان یك نشانگر انتخابی آپوپتوز فرض شده است. فعالیت PON1 با استفاده از یك سوبسترای سنتتیك مورد سنجش قرار گرفت. از سوبسترای پاراكسون (دی اتیل پارا نیترو فنیل فسفات)، برای تعیین فعالیت PON1 نسبت به پاراكسون در طول موج 412 و دمای 37 درجه استفاده شد.‌: این بررسی نشان می‌دهد سطح سیتوكراتین 18 (005/0=p)، آنزیم پاراكسوناز (03/0=p)، تری‌گلیسیرید (04/0=p) و لیپوپروتیئن با چگالی پایین (04/0=P) در بیماران كبد چرب غیرالكلی در مقایسه با افراد سالم افزایش داشته است، همچنین بین CK-18 و پاراكسوناز با مراحل اولیه بیماری كبد چرب همبستگی وجود دارد.: این مطالعه نشان می‌دهد كه اندازه‌گیری سطح سیتوكراتین18 می‌تواند در پیش‌بینی بیماران كبد چرب غیرالكلی مفید باشد و فعالیت آنزیم پاراكسوناز ((PON1 می‌تواند برای بررسی پراكسیداسیون لیپیدی و پیگیری بیماران مبتلا به NAFLD در نظر گرفته شود.

Background: Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a chronic liver disease is increasing in adults and children worldwide. Obesity, insulin resistance or diabetes type II, hyperlipidemia and hypertriglyceridemia plays a major role in the epidemiology of this disease. Cytokeratin 18 (CK-18) the major intermediate filament protein in the liver is a marker of increased hepatocyte apoptosis. The aim of this study was to determinate CK-18 level as a marker of hepatocyte apoptosis and paraoxonase as a biochemical marker for lipid peroxidation. Methods: This case–control study was done on 51 subjects with confirmed NAFLD by ultrasound and 30 healthy individuals. CK-18 is proposed as a biomarker alternative cell death. The serum was used for measurement of the apoptosis-associated neo-epitope in the C-terminal domain of CK-18 by the M30-Apoptosense ELISA kit. The M30 detection antibody recognizes a neo-epitope mapped to positions 387 to 396 of CK18, so called CK18-Asp396 that is only revealed after caspase cleavage of the protein and is postulated as a selective biomarker of apoptosis. Serum PON1 activity was assayed using a synthetic substrate. Paraoxon substrate (diethyl-p nitrophenylphosphate), was deliberated using the increase of absorbance at 412 nm at 37 ◦C. Results: There were significant differences regarding serum cytokeratin 18 (p=0.005), paraoxonase activity (p=0.03), triglycerides (p=0.04) and low-density lipoprotein (p=0.04) between NAFLD and healthy subjects. Between CK-18 and paraoxonase with the early stages of fatty liver disease are associated. Conclusion: This study suggests that serum levels of cytokeratin 18 can be useful in predicting non-alcoholic fatty liver disease. Paraoxonase activity (PON1) should be considered a biochemical marker of lipid peroxidation and the need for follow-up in patients with NAFLD Keywords: Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), non-alcoholic steatohepatitis (NASH), Cytokeratin 18 (CK-18), Paraoxonases