بررسي بيان تومورماركر سيتوكراتين 19 در رده هاي سلولي لومينال Aسرطان پستان

Study of CK19 tumor marker expression in the luminal A breast cancer cell lines

سابقه و هدف: سيتوكراتين ها (CKs) بزرگترين زيرگروه پروتيين هاي رشته اي بينابيني مي باشند كه در حين سرطاني شدن پروفايل اصلي بيانشان مرتب دچار تغيير مي شود . سيتوكراتين 19 (CK19) يكي از پروتيين هاي مهم اسكلت سلول هاي اپي تليالي است كه به عنوان ماركر سلول اپي تليالي در بيش از 90% سرطان هاي پستان ديده مي شود. در اين پژوهش بيان ماركر CK19 در رده هاي سلولي لومينال A با روش Real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) بررسي شده است. مواد و روش ها: رده هاي سلوليMCF7 و T47D كه رده هاي سلولي سرطان پستان مي باشند خريداري و طبق پروتكل مربوطه كشت داده شدند. پس از شمارش و جمع آوري، RNA آن ها استخراج شد. RNA حاصله براي ژن هاي Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase (GAPDH) به عنوان ژن مرجع و سيتوكراتين 19 (CK19) به عنوان ژن هدف با روش Real time PCR تكثير شد. از روش ??Ct براي كمي كردن بيان CK19 استفاده شد به اين صورت كه ابتدا ?Ct براي GAPDH و CK19 در هر رده سلولي به طور جداگانه محاسبه شد و سپس با توجه به ?Ct نمونه كاليبراتور بيان ژن هدف به طور كمي گزارش گرديد. يافته ها: روش فوق قادراست بيان تومور ماركر CK19 را در سلول ها گزارش كند. از طرف ديگر، اين تومور ماركر در رده هاي سلوليMCF7 و T47D بيان يكساني را نشان داد. نتيجه گيري: بيان تومور ماركر CK19 در رده هاي سلولي لومينال A به طور تقريبي به يك ميزان مي باشد. طبقه بندي رده هاي سلولي به كمك ماركر هاي مولكولي مي تواند در تحقيقات سرطاني از اهميت به سزايي برخوردار بوده و در جهت شناسايي و درمان اين بيماري رهگشا باشد .

Aim and Background: Cytokeratins (CKs) constitute the largest intermediate filamentous protein that during the development of malignancy, the original CK profile of the cell is frequently variable. Cytokeratin 19 (CK19) is known as an epithelial cell marker and CK19 expression was seen in more than 90% of breast cancers. In this study, CK19 mRNA expression by the real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) in luminal A cell lines was assessed. Materials and Methods: MCF7 and T47D breast cancer cell lines were purchased and cultured according to the recommended protocols. The cells were collected, counted and RNA was extracted from cell lines. The mRNA of CK19 as the target gene and GAPDH (Glyceraldehyde 3-phosphate Dehydrogenase) as a reference gene by real-time PCR was amplified. Quantitative CK19 expression was calculated using the ??Ct method. The average ?Ct of CK19 and GAPDH was calculated in each cell line as well as the ?Ct of GAPDH as a calibrator in different cell lines was quantitatively reported. Results: This method can be used for detection of CK19 tumor marker expression, in the cells. On the other hand, the same expression in the MCF7 and T47D breast cancer cell lines was shown. Conclusions: Expression of CK19 is the same, in the luminal A breast cancer cell lines. Molecular markers could be used for cell Lines classification which is significant in breast cancer research and it is helpful in detection and treatment of the disease.