مطالعه و مقايسه روش هاي تشخيصي ( كشت - مولكولي) بروسلا در نمونه هاي جدا شده از بيماران مشكوك به تب مالت در مناطق مختلف تهران

Study an comparison of diagnostic methods (culture – molecular) for Brucella in the samples isolated from patients suspected to brucellosis in different region Tehran

سابقه و هدف: بروسلوزيس يك عامل عمده زنويوز بوده و در بسياري از كشورهاي جهان از جمله ايران، يك مشكل اساسي بهداشت جامعه مي باشد. روش هاي جديد تشخيصي كه داراي حساسيت بالايي مي باشد و خطر عفونت در پرسنل آزمايشگاهي را به حداقل رسانده و از اهميت بالايي برخوردار است. از جمله روش هايي كه اين مزايا را دارد، واكنش زنجيره اي پليمراز(PCR) است. در اين مطالعه روش هاي تشخيصي (كشت - مولكولي) بروسلا در نمونه هاي جدا شده از بيماران مشكوك به تب مالت در مناطق مختلف تهران را مورد مقايسه و ارزيابي قرار گرفت. مواد و روش ها: 100 بيمار مشكوك به بروسلوز داراي علايم بيماري به آزمايشگاه مسعود تهران، بيمارستان بقيه الله، علوم پزشكي ايران براي نمونه گيري از خون مراجعه كردند. هر نمونه در محيط كشت خون (كاستاندا) تلقيح شده و در شرايط دمايي 0c37 و %5 دي اكسيدكربن، به مدت 21 تا 30 روز قرارگرفت. سويه هاي استاندارد بروسلا از آزمايشگاه رفرانس تهيه و در شرايط استاندارد نگه داري شدند. كليه مقاله هاي منتشر شده در خصوص پرايمرهاي اختصاصي بروسلا جمع آوري و بررسي گرديد و پرايمر اختصاصي B4/B5كه يك قطعه ژني bp 223 را تكثير مي كنند مورد مطالعه قرار گرفت. يافته ها: از 10? نمونه خون گرفته شده از افراد مشكوك به بروسلوز، دو نمونه كشت مثبت شد وDNA توسط كيت سيناژن جدا شد و پس از انجامPCR ، 15 مورد مثبت شدند. حساسيت روش PCR،100 درصد و ويژگي آن 73/86 درصد تعيين شد. بحث: اين مطالعه نشان داد كه روش PCR داراي آلودگي‌ بيولوژيكي كمي است و از حساسيت و دقت بالايي برخوردار مي باشد. نتيجه گيري: با توجه به اهميت فراوان تشخيص مولكولي بيماري هاي عفوني، حتي در حد 10 نانو گرم از DNA باكتري در نمونه هاي آزمايشگاهي و هم چنين در بالا بودن حساسيت روش استفاده شده در تشخيص اين گونه بيماري ها براساس نتايج به دست آمده از تحقيق حاضر و پژوهش هاي پيشين، تكنيك PCR در مقايسه با روش كشت به نظر مي رسد كه از حساسيت و دقت بالاتري برخوردار مي باشد. لذا اين موضوع مي تواند دليلي براي جايگزين شدن اين روش به عنوان روش تشخيصي در آزمايشگاه ها باشد.

1. Adrian, M., Whatmore Current understanding of the genetic diversity of Brucella, an expanding genus of zoonotic pathogens. Infection Genetics and Evaluation, 2009. 1168-1184. 2. Al Dahouk, S., et al., Laboratory-based diagnosis of brucellosis-a review of the literature. Part II: serological tests for brucellosis. Clin Lab, 2003. 49: 577-89. 3. Ariza, J., et al., Specifi C antibody profile in human brucellosis. Clin Infect Disk, 1992. 14: 131-40. 4. Bricker, BJ., et al., Cloning expression and occurrence of the Brucella Cu-Zn dismutase. Infect Immun, 1990. 58:2933-9. 5. Corbel, MJ., et al., Brucellosis: an Overview. Emerg Infect Dis, 1997. 3(2):213-21. 6. Craig, CF., et al., Malta fever, its occurrence in the United States Army, with a review of the literature. Amur J Med Sci, 1903. 125:105-115. 7. Cutle, SJ., et al., Brucellosis new aspects of an old disease. Journal of Applied Microbiology, 2005. 98: 1270-1281. 8. Dalrympl, CH., et al., Brucellosis infection and undulant fever in man. Oxford university press, London, 1978.1-30. 9. Khosravi, AD., et al., Isolation of Brucella Melitensis and Brucella Abortus from brucellosis patients by conventional culture method and polymerase chain reaction technique. Pak J Med Sci, 2006. 22: 396-400. 10. Leal-Klevezas, DS., et al., Single-step PCR for detection of Brucella spp from blood and milk of infected animals. J Clin Microbiol, 1995.33:3087-90. 11. Mantecon, MA., et al., Utility of an immunocapture-agglutination test and an enzyme-linked immunosorbent assay test against cytosolic proteins from Brucella melitensis B115 in the diagnosis and follow-up of human acute brucellosis. Diagn Microbiol Infect Dis, 2006.55: 27-35. 12. Mantur, BG., et al., Review of clinical and laboratory features of human Brucellosis. Indian J Med Microbiol, 2007. 25: 188-202. 13. Maria, P., et al., Human brucellosis. Lancet Infect Dis, 2007.7: 775-86. 14. Mirnejad, R., et al.,Comparison of Culture and Multiplex PCR Technique for Detection of Brucella abortus and Brucella melitensis from Human Blood Samples. ZJRMS, 2013. 15(12): 5-8. 15. Mitka, S., et al., Evaluation of different PCR assays for early detection of acute and relapsing brucellosis in humans in comparison with conventional methods. J Clin Microbiol, 2007. 45(4):1211–1218. 16. Rabab, A., et al., Annals of Saudi Medicine, 2000.Vol 20, Nos 3- 4. 17. Richtzenhain, LJ., et al., A multiplex PCR for the detection of Brucella spp.and Leptospira spp DNA from aborted bovinefetuses. Vet Microbiol, 2002. 87: 139-47. 18. Shen, MW., Diagnostic and therapeutic challenges of childhood brucellosis in a nonendemic Country. Pediatrics, 2008. 121: 1178-83. 19. Williams, E., et al., Brucellosis in Textbook of Medicine. 4th edition. Oxford: Oxford University Press, 2003.1228p, 351-362. 20. Xavier, MN., et al., Pathogenesis of Brucella spp. The Open Veterinary Science J., 2010. 4:109-118.