توليد آنتي‌بادي مونوكلونال بر ضد پروتيين نوكليوكپسيد ويروس برونشيت عفوني ماكيان (IBV)

Production of monoclonal antibody against the nucleocapsid (N) protein of infectious bronchitis virus (IBV)

ويروس برونشيت عفوني (IBV) طيور يكي از عوامل بيماري زاي ويروسي بسيار مهم است كه داراي چندين سروتيپ ميباشد. كنترل موثر عفونتهاي ناشي از اين ويروس از طريق واكسيناسيون و تشخيص سريع بيماري قابل انجام است. پروتيين نوكليوكپسيد IBV (N) يكي از پروتيين هاي ساختماني حفاظت شده اين ويروس است كه براي طراحي كيت هاي تشخيصي و توليد آنتي بادي منوكلونال مورد توجه قرار گرفته است. در مطالعه حاضر پروتيين N ويروس برونشيت عفوني طيور سويه واكسن H120 در باكتري Escherichia coli بيان و سپس خالص گرديد تا به عنوان آنتي ژن براي توليد آنتي بادي منوكلونال مورد استفاده قرار گيرد. 2 آنتي بادي منوكلونال (1F9 و 6C3) كه پروتيين N نوتركيب را شناسايي ميكردند توليد و واكنش آنها با پروتيين طبيعي ويروس در آزمايشهاي وسترن بلات و ايمونودات بررسي گرديد. هر دو آنتي بادي قادر به شناسايي پروتيين N در مايع آلانتوييك تخم مرغ تلقيح شده با IBV در آزمايش وسترن بلات بودند اما در آزمايش ايمونودات تنها آنتي بادي 1F9 مثبت بود. آنتي بادي 1F9 همچنين قادر به شناسايي سويه هاي 4/91 و QX IBV در آزمايش ايمونودات بود. به نظر ميرسد اين آنتي بادي منوكلونال داراي كاربرد تشخيصي باشد.

Infectious bronchitis virus (IBV) is an important viral pathogen of chickens with several serotypes. Efficient control of the infections caused by IBV relay on the vaccination and rapid diagnosis of infections. The nucleocapsid (N) protein of the virus is a conserved structural protein, considered as a candidate antigen for developing diagnostic kits and production of monoclonal antibodies. In the present study the N protein of infectious bronchitis virus, H120 vaccine strain was expressed in Escherichia coli in order to be used as antigen for the production of monoclonal antibodies. Two monoclonal antibodies (1F9 and 6C3) reactive against the recombinant N protein were produced and tested for their reaction with the native viral N protein by Western blotting and immunodot. Both antibodies recognized the N protein in Western blotting but only 1F9 antibody was positive in immunodot. 1F9 antibody also reacted with 4/91 and QX stains of IBV. It appears this monoclonal antibody possess the diagnostic application.