تأثير DMSO در القاي تمايز كارديوميوسيت ها از سلول هاي كارسينوماي جنينيP19در شرايط آزمايشگاهي

The Effect of DMSO in Induction of Differentiation of Cardiomyocytes from Embryonic Carcinoma Cells P19 in Invitro

مقدمه: در مطالعه حاضر توانايي تمايز سلول هاي كارسينوماي جنيني P19در غلظت هاي مختلف DMSO به كارديوميوسيت ها مورد ارزيابي قرار گرفت. مواد و روش ها: جهت تمايز سلول هاي P19، اجسام شبه جنيني(Embryoid Bodies,EBs) به روش قطرات آويزان طي 2 روز تشكيل شدند. سپسEBs به مدت 18 روز تحت القائات غلظت هاي مختلف DMSO 1/0 درصد، 5/0 درصد، 1 درصد، 5/1 درصد، 2 درصد قرار گرفتند. طي تمايز تعداد ضربان در دقيقه هر سه روز يك بار در گروه هاي مختلف با ميكروسكوپ معكوس شمارش شدند. جهت شناسايي بيان پروتئين Factin از ايمونوسيتوشيمي استفاده شد. يافته هاي پژوهش: تغييرات مورفولوژيكي زيادي در كارديوميوسيت هاي مشتق شده از P19 به ويژه در گروه DMSO 5/0 درصد ايجاد شد به طوري كه افزايش مشخصي در اندازه سيتوپلاسم و زوايد سيتوپلاسمي آن ها ديده شد. نتايج شمارش روزانه نشان داد كه حداكثر تعداد ضربان در دقيقه در غلظت 5/0 درصد و در روز 12+2 (2 روز براي تشكيل اجسام شبه جنيني به علاوه 12 روز پس از القاي تمايز) مشاهده شد. علاوه بر اين كارديوميوسيت تمايز يافته پروتئين Factin را تنها در حضور غلظت 5/0 درصد DMSO بيان كردند در حالي كه اين پروتئين در ساير غلظت ها بيان نشد. بحث و نتيجه گيري: يافته هاي پژوهش حاضر پيشنهاد مي نمايد كه اولاً موثرترين غلظت DMSOدر فرآيند القاي كارديوژنزيس غلظت5/0 درصد است. ثانياً يكي از مطلوب ترين رده هاي سلولي جهت تمايز كارديوميوسيت ها، سلول هاي كارسينوماي P19 مي باشد.

Introduction: In the present study, the ability of P19 embryonic carcinoma cell differentiation to cardiomyocytes in different concentrations of DMSO was evaluated. Materials Methods: In order to providing differentiated P19 cells, embryoniclike objects (Embryoid Bodies, EBs) formed during 2 days through hanging drops method. Then EBs induced for 18 days under the different concentrations of DMSO (0.1%, 0.5%, 1%, 1.5% and 2%). The rate of cardiomyocytes beating was counted with three days interval in the various groups by inverse microscope. Immunocytochemistry was used to illustrate expression of Factin protein. Findings: Many morphological changes occurred in cardiomyocytes derived from P19 especially in DMSO 0.5% group, so a remarkable increase in the size of the cytoplasm and cytoplasmic processes was observed. The results revealed that the maximum beating frequency per minute was observed in DMSO 0.5% group concentration in 2+12 days (2 days for making emberyonic bodies, and 12 days after differentiation induction). In addition, only cardiomyocytes induced differentiation by DMSO 0.5% concentration expressed Factin which was not expressed in the other concentrations. Discussion Conclusion: The findings of this study suggest that, firstly, the most effective concentration in the process of cardiogenesis induction is 0.5%. Secondly, P19 carcinoma cells are desirable and susceptible to differentiate cardiomyocytes.