DNA آزاد جنيني و تشخيص پيش از تولد با روش PCR-RFLP در بتا تالاسمي

Cell Free Fetal DNA and Prenatal Diagnosis with PCR-RFLP Method in Beta Thalassemia

مقدمه: بتا تالاسمي يك اختلال خوني ارثي است كه ناشي از سنتز غير معمول زنجيره هاي بتاگلوبين است. نمونه برداري از پرزهاي كوريوني و يا آمنيوسنتز براي تشخيص قبل از تولد يك روش تهاجمي است. DNA آزاد جنيني موجود در پلاسماي مادر منبع بسيار خوبي از مواد ژنتيكي براي تشخيص هاي مولكولي پيش از تولد جنين مي باشد. هدف از اين مطالعه ارائه يك روش غيرتهاجمي براي تشخيص پيش از تولد بتا تالاسمي بر اساس الگوي انتقال پلي مورفيسم هاي به ارث رسيده از پدر به جنين مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه 30 زوج كه جنين آن ها در معرض ابتلا به بتا تالاسمي قرار دارند مورد بررسي قرار گرفتند. از مادران باردار خون وريدي گرفته و پلاسماي آن كه حاوي DNA آزاد(غير سلولي) اعم از DNA مادري و جنيني مي باشد، جدا سازي گرديد. سپس مقرهاي پلي مورفيك پيوسته به ژن بتاگلوبين براي هر خانواده با استفاده از PCR-RFLP بررسي گرديدند. يافته هاي پژوهش: در اين تحقيق 7 خانواده با ريسك جنين تالاسمي كه الگوي RFLP آن ها از قبل مشخص شده و امكان بررسي انتقال ژن تالاسمي پدري براي آن ها وجود داشت مورد مطالعه قرار گرفتند. با آن كه DNA جنيني نسبت به DNA مادري از ميزان بسيار كمتري دارد، الگوي ويژه RFLP جنين شناسايي شده و نوع آلل انتقال يافته از پدر به جنين مشخص شد. بحث و نتيجه گيري: در اين مطالعه، نتايج RFLP پلاسما مادر با نمونه CVS در 7 خانواده مورد بررسي، مطابقت داشت. پس مي توان از DNA آزاد جنيني موجود در سرم مادر، جهت تشخيص قبل از تولد استفاده نمود.

Introduction: Beta thalassemia is a hereditary blood disorder characterized by anomalies in the synthesis of the beta chains of hemoglobin. Chorionic Villus Sling (CVS) is used for fetal genotyping and as it is an invasive procedure, it has the risk of abortion. As a result, it is desirable to use a noninvasive method instead. The aim of this study was to present a noninvasive method for prenatal diagnosis of betaThalassemia based on pattern of paternal polymorphism. Materials methods: In this study 30 families with the risk of thalassemia were screened. RFLP pattern of these families were identified and it was possible to investigate the transmission of paternal gene for thalassemia. Whole blood sle was drawn from mothers at gestation weeks 1012 and their plasma was separated. Findings: A cellular DNA of 7 plasma that contains DNA from both mother and fetus was investigated for RFLP informative sites of betaglobin gene. Discussion Conclusion: Although the amount of fetal DNA in plasma is less than maternal DNA, we could detect specific RFLP pattern of fetus and identified transmission of paternal allele.