تعيين كمي بار ويروسي هپاتيت C با استفاده از روش Real-Time PCR In-House در بيماران آلوده به هپاتيت C در شهرستان خرم آباد

The quantification of hepatitis C viral load using an In-House Real-Time PCR assay in HCV infected patients in Khorramabad city

مقدمه: روش هاي تشخيصي مولكولي ابزار عمده اي در مديريت بيماران مبتلا به ويروس هپاتيتHCV)C ) هستند. مطالعات نشان داده اند كه بار ويروسي با مرحله عفونت و ميزان پاسخ به درمان مرتبط مي باشد و لذا ارزيابي و تعيين بار ويروسي اهميت بسزايي دارد. هدف از اين مطالعه بكارگيري روش دقيق و در عين حال ارزان قيمت جهت سنجش كمي بار ويروسي در پلاسماي بيماران مي باشد. مواد و روش ها: پس از راه اندازي و تعيين اعتبار روش راه اندازي شده، سنجش كمي بار ويروسي بر روي پلاسماي 200 بيمار آلوده به فرم مزمن HCV انجام شد. بار ويروس با استفاده از منحني استاندارد خارجي و با بهره گيري از پانل استاندارد RNA صورت گرفت. نتايج حاصل از اين روش با نتايج بدست آمده از كيت تجاري آرتوس مقايسه شد. يافته ها: محدوده تعيين اين روش IU/ml 50 مي باشد. ميانگين بار ويروسي اندازه گيري شده در مقياس لگاريتمي (22/0  81/5)، (05/0P lt ) بدست آمد. آناليز موازي نمونه ها با استفاده از اين روش و كيت تجاري آرتوس همبستگي خوبي بين دو روش نشان داد (05/0 gt P ، 988/0=R2). بحث و نتيجه گيري: تعيين كمي بار ويروسي HCV در افراد آلوده به اين ويروس در شهرستان خرم آباد براي اولين بار گزارش شده است. توجه به نتايج، اين روش داراي حساسيت خوب و ويژگي براي سنجش كمي HCV RNA در مقياس بزرگ است. اين روش مي تواند جايگزين مناسبي براي كيت هاي تجاري به ويژه براي ارزيابي باليني درمان باشد.

Background : Molecular diagnostic methods are among major tools in management of hepatitis C virus (HCV) in infected patients. Many studies have shown that viral load is associated with stage of infection and response to treatment. Therefore, the evaluation and quantification of viral load is very important. The goal of this study is implementation of inexpensive, yet accurate method for quantitative assessment of viral load in plasma sles of infected patients. Materials and Methods: After development and validation of the assay, quantification of HCV RNA on 200 chronic patients the start of therapy was performed using an InHouse Realtime PCR assay. Measuring the concentration of viral RNA was performed using an external standard curve. It should be noted that the validation and standardization of all procedures in this study were performed using RNA standard panel. The results of this method were compared with results obtained from Artus commercial kit. Results: Detection limit of the assay was 50 IU/ml. The mean viral load measured on a logarithmic scale (5/81plusmn 0/22, plt 0/05). Parallel analysis of sles with commercial kit showed that there is a good correlation between these two methods (R2 = 0.988 plt 0.05). Conclusion: Viral load detection of HCV was reported for the first time in Khorramabad city. According to the results, this method has a good sensitivity and specificity for HCV quantification in largescale. It can be a good replacement for commercial kits especially for clinical evaluation of therapy.