تأثير ليپوپلي‌ساكاريد و پلي‌ريبوسيتديليك‌اسيدبه‌عنوان (آگونيست‌هايTLR)، بر ميزان توليد نيتريك‌اكسايدو القاء آپوپتوزيس در سلول‌هايTفعال‌شده توسط سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال موش

EFFECT OF LPS AND POLY: IC (TLR AGONISTS) ON NITRIC OXIDE PRODUCTION AND APOPTOSIS INCUBATION IN ACTIVATED T CELLS BY MOUSE MESENCHYMAL STEM CELLS (MSCS)

پيش زمينه و هدف:سلول هاي بنيادي مزانشيمال، سلول هاي بالغ پيش ساز غير خون ساز و چندتوان معرفي مي گردند. سيماي پيش التهابي يا ضدالتهابي اين سلول ها در پاسخ هاي ايمني با فعال شدن گيرنده هاي شبه تول خاص ظاهر مي گردد. هدف پژوهش حاضر بررسي تأثير ليپوپلي ساكاريد و پلي ريبوسيتيديليك اسيد در غلظت هاي مختلف و زمان هاي مختلف انكوباسيون بر ميزان توليد نيتريك اكسايد و القاء آپوپتوزيس در سلول هايTفعال شده و ارتباط اين دو است. مواد و روش كار: از استخوان هاي ران و درشت ني به روش فلاشينگ، سوسپانسيون سلولي تهيه و سلول هاي مزانشيمال به روش چسبندگي پلاستيك جداسازي شدند. پس از بارآمدگي 70 درصدسلول ها، سلول ها با آگونيست هاي (TLR، Poly: IC (يك و پنج ميكروگرم بر ميلي ليتر)، و LPS 10و 20 نانوگرم بر ميلي ليتر) و غلظت تركيبي كمينه (Poly: ICيك ميكروگرم بر ميلي ليتر و LPS 10 نانوگرم بر ميلي ليتر) (LP) در دو زمان مجزاي يك و 12 ساعت تيمار شدند. نيتريك اكسايد مايع روئيسلول ها، با روش گريس سنجيده شد. درصد آپوپتوزيس سلول هايT ، با روش فلوسايتومتري رنگ آميزي اكريدين-اورنج/پروپيديوم - آيدايد اندازه گيري گرديد. يافته ها: يافته ها نشان داد كه Poly: IC بيشترين ميزان آپوپتوزيس را در غلظت پايين (يك ميكروگرم بر ميلي ليتر و پس از گذشت 12 ساعت) اعمال مي نمايد. درحالي كه بيشترين ميزان آپوپتوزيس سلول هايT در تيمار با LPS در غلظت بالا (20 نانوگرم بر ميلي ليتر و يك ساعت) انكوباسيون به دست آمد (P<0.05). همچنين افزايش ميزان آپوپتوزيس سلول هايT در ارتباط با توليد نيتريك اكسايدمي باشد. بحث و نتيجه گيري: بر اساس نتايج به دست آمده مي توان نتيجه گرفت كه غلظت آگونيست و زمان تيمار سلول هاي بنيادي با آن مي تواند اثرات مختلفي در توليد نيتريك اكسايد و فعاليت آپوپتوزيMSCها داشته باشد.

Abstract Background Aims: Mesenchymal stem cells (MSCs) were introduced as multipotent nonhematopoietic precursor adult cells. Pre or antiinflammatory features of these cells appear on immune responses by activating specific tool like receptors (TLRs). The aim of this study was to evaluate the effect of Lipopolysaccharide and Polyribocytidylic Acid on different concentration and times of incubation on nitric oxide production and apoptosis induction in activated Tcells. Materials Methods: Suspension cells were prepared through the femural and tibial bones by flushing method and Mesenchymal cells were isolated by plastic adhesion technique. When the cultures reached % 70 confluence, cells treated with TLR agonists, Poly: IC (1 and 5 micro g/ml), LPS (10 and 20 ng/ml) and the lowest combination concentrations (Poly: IC 1micro g/ml and LPS 10ng/ml) (LP) at two different times, 1 and 12hr. Nitric oxide of cell surface liquid were measured by Griess (year) method. Apoptosis percentage in T cells was assayed by flowcytometry in the presence of Achridin orangeropidium iodide (AO/PI). Results: The results showed that Poly: IC could induce the highest T cells apoptosis at low concentration (1 micro g/ml) after 12hr incubation. But, LPS could cause T cells apoptosis at high concentration (20 ng/ml) after 1hr incubation (P<0.05). Also, an increase in T cells apoptosis could be related to nitric oxide production. Conclusion: These findings suggest that the concentration of agonist and treatment period of the stem cells could affect nitric oxide production and apoptotic activity in MSCs. SOURCE: URMIA MED J 2016: 26(10): 864 ISSN: 10273727