ساخت و بررسي كارآيي ناقل بياني گياهي pBI105، با هدف سهولت همسانه سازي و خالص سازي پروتئين نوتركيب

ناقلين دوتايي مرسوم مثل pBI121 كه هنوز به طور گسترده اي در انتقال ژن به گياه به واسطه آگروباكتريوم استفاده مي شوند، عمدتاً تعداد محدودي جايگاه منحصر به فرد شناسايي آنزيم هاي برشي در جايگاه همسانه سازي خود دارند. همچنين اين ناقل ها فاقد بسياري از عناصر و توالي هاي مفيد مثل توالي هاي مورد استفاده در خالص سازي پروتئين نوتركيب هستند. در اين مقاله يك ناقل بياني جديد گياهي با جايگاه همسانه سازي توسعه يافته شامل توالي شناسايي 13 آنزيم برشي منحصر به فرد، توالي رمز كننده His-Tag با تكرار هشت اسيد آمينه هيستيدين براي خالص سازي پروتئين نوتركيب، توالي مورد شناسايي آغازگر عمومي M13، به عنوان آغازگر معكوس توالي يابي معرفي مي شود. پس از طراحي و ساخت اين ناقل، صحت ساخت آن با روش هاي مولكولي مانند PCR، بررسي الگوي هضم آنزيمي و تعيين توالي تاييد شد. براي بررسي كارآيي ناقل جديد، ژن گـزارشگر -galactosidase β در آن همسانه سازي شده و سازه حاصل و همچنين ناقل pBI121 به عنوان كنترل، به آگروباكتريوم تومي فاشينس سويه LBA4404 منتقل و در نهايت به گياه توتون، رقم سامسون منتقل شدند. پس از انجام مراحل باززايي، انتقال ناحيه T-DNA اين ناقل به گياهچه هاي توتون با روش PCR بررسي و تاييد شد. سنجش فعاليت GUS در گياهان تراريخت حاكي از بيان موثر ژن گزارشگر و كارآيي ناقل جديد در تراريختي گياه مي باشد.