بررسي اثر جانبي بوسولفان در بافت بيضه و اسپرم اپي‏ديديمي موش بالغ بدنبال تيمار با دوز درمانگاهي

Study of side effects of busulfan on testis tissue and epididymal sperm of adult mice following treatment with clinical dose

هدف: هدف از اين تحقيق بررسي آثار جانبي دوز درمانگاهي بوسولفان بر بافت بيضه و اسپرم اپي‏ديديمي موش نر بالغ است. مواد و روش‏ها: موش‏هاي نر بالغ نژاد NMRI (25 تا 35 گرم) به دو گروه شانزده تايي تقسيم شدند. كنترل و گروه تيمار با بوسولفان كه به‏ترتيب 100 ميكروليتر DMSO(Dimethyl Sulfoxide) و 2/3 ميلي‏گرم بر كيلوگرم بوسولفان به‏مدت چهار روز دريافت كردند. حيوانات 35 روز بعد از آغاز درمان كشته شدند. تغييرات بافتي در لوله سمي نيفر، پارامترهاي كيفي اسپرم (تعداد و مورفولوژي)، قابليت حيات و شكست كروموزومي اسپرم به‏ترتيب به‏وسيله ميكروسكوپ نوري، CASA (Computer–aided Sperm Analyzer) ، سنجش MTT (3[4, 5Dimethylthiazol2yl]2, 5 Diphenyltetrazolium Bromide) و سنجش تانل بررسي شدند. نتايج: بوسولفان به‏طور معني‏داري منجر به كاهش پارامترهاي اسپرم (تعداد و مورفولوژي طبيعي) و افزايش تخريب ديواره لوله سمي نيفر شد. ناهنجاري‏هاي سر، قطعه مياني و دم در اسپرم گروه درمان در مقايسه باكنترل به‏طور معني‏داري كاهش يافته بود. از سوي ديگر، سطوح پايين‏تر MTT در گروه درمان در مقايسه با كنترل معني‏دار بود. افزايش تعداد اسپرم‏هاي تانل مثبت در گروه درمان نشان دهنده افزايش شكست كروموزومي به‏دنبال درمان با بوسولفان بود. نتيجه گيري: نتايج نشان داد كه دوزهاي درمانگاهي بوسولفان آثار ژنوتوكسيك، پرآپوپتوتيك و سيتوتوكسيك بر روند اسپرماتوژنز مي‏گذارد. علاوه بر آن، بوسولفان سيتوتوكسيستي را در بافت بيضه افزايش مي‏دهد.

Aim: The aim of this study was to assess side effects of clinical dose of busulfan on testis and epididymal sperm of adult male mouse. Material and Methods: Male adult NMRI mice (2535 g) were divided into two groups of sixteen each. Control and busulfan treated group were administered 100 μL DMSO (Dimethyl Sulfoxide) and 3.2 mg/kg busulfan for 4 days, respectively. The animals were sacrificed 35 days after starting treatment. The histological change on germinal epithelium, sperm quality parameters (count and normal morphology), viability and DNA fragmentation on sperm were analyzed by light microscopy, CASA (Computer–aided Sperm Analyzer), MTT (3[4, 5Dimethylthiazol2yl]2, 5 Diphenyltetrazolium Bromide) and TUNEL assays, respectively. Results: Busulfan administration significantly decreased parameters of sperm (count and normal morphology) and increased germinal epithelium destruction. The head, mid piece and tail abnormalities of treated group were increased significantly versus control. The lower levels of MTT in treated group were significant compared with control group. Higher levels of TUNEL positive cells that were found in treated groups demonstrated the increasing of DNA fragmentation in sperms following busulfan treatment. Conclusion: The results showed that clinical dose of busufan induces genotoxic, preapoptotic and cytotoxic effects on spermatogenesis. Also, busulfan can increase cytotoxicity on testis tissue of adult male mouse.