بررسي تأثير تيمار با AntimiR-182بر روي افزايش حساسيت به داروي سيس پلاتين در سلول‌هاي Hela

Evaluation of the AntimiR-182 Effects on the Cisplatin Sensitivity in Hela Cells

مقدمه: miRNA‌ها مولكول‌هاي RNA تك رشته‌اي غيركدكننده به طول حدود 21 تا 23 نوكلئوتيد هستند كه ترجمه نمي‌شوند و در كنترل بيان ژن نقش مهمي دارند. آنها به‌عنوان انكوژن يا تومور ساپرسور نقش مهمي در بروز برخي سرطان‌ها دارند. در گزارشات مختلف miR-182 به‌عنوان آنكومير در سرطان گردن رحم معرفي شده است كه مانع از انجام آپوپتوز در سلول مي‌گردد. هدف از مطالعه حاضر بررسي تأثير AntimiR-182 در رده سلولي سرطاني Hela روي القاي آپوپتوز در حضور داروي سيس پلاتين و كاهش مقاومت دارويي مي‌باشد.مواد و روش‌ها: پس از كشت سلول‌هاي Hela با افزودن دوزهاي مختلف داروي سيس پلاتين و بررسي ميزان مرگ و مير سلول‌ها به‌روش MTT، ميزان LD50 دارو به‌دست آمد. سپس با استفاده از حجم‌هاي مختلف ليپوفكتامين و miR كنترل نشاندار شده شرايط ترانسفكشن بهينه و غلظت اپتيمم AntimiR-182 محاسبه گرديد. در نهايت AntimiR-182 و سيس پلاتين به‌طور مجزا و همزمان به سلول‌هايHela منتقل و ميزان كاهش تكثير سلولي و افزايش آپوپتوز ناشي از مهار به‌وسيله AntimiR-182 به تنهايي و همراه با سيس پلاتين با روش MTT و فلوسايتومتري مورد ارزيابي قرار گرفت.نتايج: نتايج حاصل بيانگر آن است كه تيمار سلول‌ها با AntimiR-182 و سيس پلاتين موجب افزايش معني‌دار مرگ سلول‌ها از 68% (تيمار با سيس پلاتين) به 81% (تيمار همزمان با AntimiR-182 و سيس پلاتين) شده است (05/0P lt ). اين افزايش به‌صورت آپوپتوز و نكروز سلول‌ها مي‌باشد.نتيجه‌گيري: مطالعه حاضر نشان مي‌دهد كه بيان miR-182 ممكن است در افزايش مقاومت به شيمي درماني سلول‌هاي سرطاني نقش داشته باشد. استفاده از AntimiR-182 توأم با سيس پلاتين منجر به تقويت اثر سيس پلاتين و در نتيجه كاهش غلظت LD50 سيس پلاتين مي‌شود، بنابراين مي‌توان از آن به‌عنوان يك درمان مكمل به‌منظور افزايش حساسيت سلول‌هاي سرطاني به درمان و كاهش مقاومت دارويي استفاده كرد.

Introduction: MicroRNAs (miRNAs) are single-stranded noncoding RNAs of 21–23 nucleotides that are not translated and have a basic role in gene expression.. They have an important role as a oncogene or tumor suppressor in human cancers.It has been reported that miR-182 in cervical cancer is an oncogene which is inhibited apoptosis in tumor cells. The aims of this study was evaluation of the miR-182 inhibition effect on induction of apoptosis in Cisplatin treated Hela cells.Methods: The Hela cells were cultured and treated with different doses of Cisplatin, then viability of cells was assessed with MTT and LD50 of Cisplatin in hela cells obtained.  The transfection condition was optimized by using serial dose of lipofectamine and labeled control miR, then optimum concentration of AntimiR-182 was calculated. Finally, AntimiR-182 and cisplatin separately and simultaneously were transfected into Hela cells, and the reduction in cell proliferation and increased of apoptosis rate of treated cells were analyzed by MTT and flow cytometric assay.Results: The Hela cells which is transfected with both AntimiR-182 and cisplatin became more sensitive to cell death than cells which treated with cisplatin only. We found a significantly increase in cell death (apoptosis and necrosis) from 68% to 81% following the transfection with AntimiR-182 and cisplatin (Plt 0.05).Conclusion: The results of the present study shows that expression of miR-182 may have a significant effect in resistance of tumor cells to chemotherapy. Using simultaneously of AntimiR-182 and cisplatin have an additional effect on cisplatin, so, it reduces LD50 of cisplatin. Therefore, AntimiR-182 can be used as a complementary methods of treatment for increasing sensitivity of tumor cells to treatment and decreasing drug resistance.