جداسازي و كلونينگ ژن ايزوفلاون سنتتاز از گياه سويا رقم ويليامز III

ايزوفلاونوييدها، دسته­اي از تركيبات فلاونوييدي هستند كه با استفاده از آنزيم ايزوفلاون سنتاز از پيش­ماده فلاوانوني در گياهان لگوم توليد مي­شوند. مهم­ترين ايزوفلاون­هاي موجود در گياه سويا شامل: جنيستين و ديدزين مي­باشند كه خواص دارويي زيادي دارند. تحقيقات نشان مي­دهد كه مصرف مرتب اين تركيبات خطر ابتلا به سرطان­هاي وابسته به هورمون­هاي جنسي را كاهش داده و كاهش علايم يائسگي، پوكي استخوان، تعديل كلسترول خون، بهبود بيماي­هاي كرونري قلبي و غيره همگي از مزاياي استفاده از اين تركيبات مي­باشد. در اين پژوهش به­منظور جداسازي ژن 2- هيدروكسي ايزوفلاوانون سنتاز (IFS) ابتدا RNA كل از سويا جداسازي شده و كتاب­خانه cDNA ساخته شد. ژن IFSبا پرايمرهاي اختصاصي با مكان­هاي برشي HindIII و XbaI از طريق PCR تكثير گرديد و سپس ژن تكثير شده با اندازه 1566 جفت بازي پس از خالص­سازي از روي ژل در مكان XbaI/HindIII در ناقل بياني pET28a+ كلون­ شد. سپس پلاسميد نو­تركيب به استرينXLI-Blue باكتري E. coli منتقل گرديد. وجود ژن IFS در پلاسميد­هاي نوتركيب با دو روش PCR و هضم آنزيمي مورد تائيد قرار گرفت. در نهايت، حامل مذكور را مي­توان براي بيان در داخل پروكاريوت يا با سابكلون كردن مجدد براي انتقال ژن به گياهان مختلف با روش اگروباكتريوم و تفنگ ژني مورد استفاده قرار داد.