شناسايي ايزوله‌هاي باليني كانديدا با استفاده از روش Duplex - PCR

Identification of Clinical Isolates of Candida using Duplex PCR

چكيده زمينه و هدف: كانديدا آلبيكنس عامل اصلي كانديديازيس مي‌باشد. با اين حال عفونت‌هاي ايجاد شده توسط گونه‌هاي غير آلبيكنس نيز به طورچشم‌گيري افزايش يافته است. كانديدا دابلينينسيس گونه‌اي است كه از لحاظ فنوتيپي بسيار شبيه كانديدا آلبيكنس است كه به منظور درمان مناسب بايد از هم متمايز گردند. هدف از اين مطالعه، تفكيك و شناسايي دقيق گونه‌هاي كانديدا با روش Duplex PCR به منظور دسترسي به اطلاعات اپيدميولوژيك اين گونه‌ها در نمونه‌هاي باليني مي‌باشد. مواد و روش‌ها: از كشت تازه مخمري، DNA قارچ به كمك روش فنل كلروفرم استخراج گرديد. ناحيه فواصل رونويسي شده‌ي داخلي به روش واكنش زنجيره‌اي پلي مراز و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي تكثيرشد. محصولات حاصله در ژل آگارز الكتروفورز بررسي شده و براساس تفاوت در سايز باندهاي ايجادشده،گونه‌ها شناسايي شدند. يافته‌ها: از تعدادكل 100 نمونه باليني در مطالعه حاضر، 49 نفر مرد و 51 نفر زن بودندكه 94 نفر بيماري زمينه‌اي داشتند. ديابت (4/73 درصد)، مصرف آنتي بيوتيك (3/6 درصد) و كمبود ويتامين (3/4 درصد) فاكتورهاي زمينه‌اي اصلي بودند. بيشتر نمونه‌ها مربوط به دهان (75 درصد)، واژن (5 درصد) و خون (4 درصد) بودند. تمامي ايزوله‌ها به عنوان كانديداآلبيكنس شناسايي شدند. نتيجه‌گيري: روشDuplex PCR روشي سريع براي تشخيص وتمايز دقيق گونه‌هاي كانديدا مي‌باشد كه در اين روش احتياجي به تست‌هاي اوليه فنوتيپيك مانند توليد لوله زايا، كلاميدوكونيديا و سايرتست‌هاي بيوشيميايي نبوده و براي آزمايشگاه‌هاي باليني كه منابع و زمان محدودي براي پاسخ‌گويي به بيمار دارند، مي‌تواند جايگزين روش‌‌هاي سنتي گردد.

Abstract Background: Candida albicans is still the main etiologic agent of candidiasis. However, infections of non-albicans Candida species are increasing. Candida dubliniensis is similar to C. albicans phenotypically and must be identified due to the better management of infection. The aim of the present study is to defferentiate and identify Candida species by Duplex PCR for get-ting an epidemiological data of Candida species among clinical specimens. Materials and Methods: DNA was extracted using phenol-chloroform method from fresh colonies. Internal Transcribed Spacer region was amplified by polymerase chain reaction using specific primers. Based on differences of bands sizes on agarose gel electrophoresis, species were identified. Results: Ninety four out of 100 patients (49 males and 51 females) had predisposing fac-tors in the present study. Diabetes (73.4%), use of antibiotic (6.3%), vitamin deficiency (4.3%) were the main predisposing factors. The most specimens belonged to mouth (75%), vagina (5%), and blood (4%). All isolates were identified as C. albicans. Conclusion: Duplex PCR is a rapid and precise method for the detection and differentia-tion of Candida species carefully, and in this method, phenotypic tests like germ-tube and chla-mydoconidia production, as well as biochemical tests are not required for clinical laboratories that have limited resources and time for response to the patients, and it can replace with the traditional methods.