تاثير انجماد شيشه‌اي مجدد بر ميزان تكوين و بيان ژن‌‌هاي Bax، Bcl-2 و ErbB4 در جنين‌هاي موشي

The Effect of Re-vitrification on Developmental Rate and Bax, Bcl-2, and ErbB4 Gene Expressions in Mouse Embryos

هدف: انجماد شيشه‌اي به‌عنوان روش مناسب و موثري براي فريز و نگهداري جنين‌‌ها شناخته شده ‌‌است. در برخي از شرايط مانند آماده نبودن آندومتر گيرنده ‌‌مي‌توان جنين‌‌هاي اضافي را مجدداً منجمد نمود تا بعداً مورد استفاده قرار گيرد. اطلاعات در مورد آثار انجماد مجدد روي جينين‌‌ها اندك است، بنابراين اين مطالعه آثار انجماد مجدد را روي ميزان تكوين و بيان ژن‌‌هاي مربوط به مرگ سلولي برنامه‏ريزي شده و لانه‌گزيني جنين‌‌هاي موش بررسي ‌‌مي‌كند. مواد و روش‌ها: موش‌‌هاي ماده نژاد NMRI 6-8 هفته با استفاده از تزريق 5/7 واحد بين‏المللي PMSG و 48 ساعت بعد 5/7 واحد بين‏المللي HCG تحريك تخمك‌گذاري و سپس در كنار موش نر قرار داده شدند. پس از بررسي پلاك واژني، جنين‌‌هاي 8 سلولي جمع‌آوري و به سه گروه شامل گروه كنترل (جنين‌‌‌‌هاي غير انجمادي)، گروه آزمون يك (جنين‌‌‌‌هاي 8 سلولي يك بار منجمد شده) و گروه آزمون دو (جنين‌‌هاي بلاستوسيست اوليه دو بار منجمد شده) تقسيم شدند. در پايان پس از استخراج RNA، بيان ژن‌‌هاي Bcl-2، Bax و ErbB4 با روش Real time PCR ارزيابي شد. داده‌‌هاي حاصل با آزمون مجذور كاي و آزمون آناليز واريانس يك طرفه ارزيابي شد. نتايج: نتايج اين مطالعه نشان داد كه ميزان تشكيل بلاستوسيست ثانويه و تخريب و بيان ژن‌‌هاي مورد مطالعه در گروه انجماد مجدد نسبت به گروه غير انجمادي تفاوت معني‌داري داشت. نتيجه‌گيري: فرآيند انجماد و گرم كردن در مرحله هشت سلولي تاثيري بر ميزان تكوين و بيان ژن‌‌هاي مورد مطالعه نداشت اما پس از انجماد مجدد در مرحله بلاستوسيست اوليه، ميزان تكوين و بيان ژن‌‌هاي Bax و Bcl-2 و ErbB4 تغيير يافت.

Objective: Vitrification is a convenient, effective method for freezing and storing embryos. Under certain situations, such as an unsuitable endometrial environment, extra embryos can be re-vitrified for future use. There is inadequate data on the effects of re-vitrification on embryos, so we have evaluated the effects of re-vitrification on the development rate and expression of apoptotic and implantation genes. Methods: Female NMRI mice, ages six-eight weeks were super-ovulated with 7.5 IU PMSG and 7.5 IU hCG. Females were mated with males from the same strain and inspected for the presence of vaginal plugs the following morning. Females with the presence of vaginal plugs were considered to be pregnant and killed 62 h post hCG injection. Eight-cell embryos were flushed from their oviducts and subsequently divided into three experimental groups: fresh, vitrified-warmed 8-cell embryos, and re-vitrified-warmed blastocyst embryos. RNA was extracted and we used real-time PCR to evaluate expressions of Bax, Bcl-2, and ErbB4. Data was analyzed by the chi-square and ANOVA tests. Results: A significant difference existed in blastocyst formation rate, degeneration rate, and expressions of Bax, Bcl-2, and ErbB4 in re-vitrified embryos compared to fresh embryos. Conclusion: The vitrification and warming process did not affect the developmental rate and expressions of Bax, Bcl-2, and ErbB4 in the eight-cell stage embryos. However, we observed a change in development rate and expression rates of Bax, Bcl-2, and ErbB4 after re-vitrification in the early blastocyst stage.