بررسي اثر عصاره پلاكتي مشتق از خون بندناف بر تكثير سلول‌هاي تك‌هسته‌اي خون بندناف در آزمايشگاه

مقدمه و هدف: علي‌رغم نتايج رضايت‌بخش پيوند خون بندناف در درمان بعضي بيماري‌هاي خوني، يكي از چالش‌ها در اين زمينه، حل مشكل تعداد كم اين سلول‌ها مي‌باشد. سال‌هاي اخير عصاره پلاكتي به‌لحاظ غني‌بودن از فاكتورهاي رشد به‌عنوان مكمل كشت سلول مزانشيم در سلول درماني معرفي ‌شده ‌است. هدف اين مطالعه، بررسي اثر عصاره پلاكتي مشتق از خون بندناف بر تكثير، تمايز و درصد زنده‌ماني سلول‌هاي تك‌هسته‌اي خون بندناف در شرايط آزمايشگاهي است. مواد و روش‌ها: كنسانتره پلاكتي در غلظت plt/ml109×2 از پلاسماي خون بندناف تهيه شد. تعداد 106 سلول تك‌هسته‌اي خون بندناف در حضور سايتوكاين‌هاي Flt3L، SCFوTPO حاوي غلظت‌هاي متفاوت (10%-0) از عصاره پلاكتي مشتق از خون بندناف كشت شدند. درصد زنده‌ماني اين سلول‌ها با استفاده از رنگ‌آميزي تريپان بلو، سنجش تمايز سلول‌هاي تك‌هسته‌اي آزمايش Colony Assay، اندازه‌گيري درصد سلول‌هاي بنيادي خون‌ساز با شاخص سطحي (CD133+ CD34+ CD38-) از طريق فلوسايتومتري و بيان كمي ژن CD34 با روشQRT- PCR مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: غلظت 5? عصاره پلاكتي مشتق از خون بندناف همراه با سايتوكاين‌ها سبب تكثير 12برابري (P < 0.0001) سلول‌هاي تك‌هسته‌اي خون بندناف، 6/1 برابر كلوني BFU-E، 1/2 CFU-GM، 7/1 CFU-MIX و 3/3 برابر سلول‌هايCD133+ CD34+ CD38- مي‌شود. ژن CD34 نيز در گروه ?? LP -UCB افزايش معني‌دار نشان داد. نتيجه‌گيري: عصاره پلاكتي خون‌ بندناف را مي‌توان به‌عنوان مكمل در كشت سلول‌هاي تك‌هسته‌اي خون بندناف و سلول‌هاي بنيادي خون‌ساز به‌منظور افزايش تكثير و حفظ خاصيت بنيادي آن‌ها استفاده كرد.

Background and Objective: In spite of promising results in treatment of blood diseases by umbilical cord blood cell transplantation, low number of derived stem cells has been a matter of concern. Since platelets extracts has been introduced as a potent mesenchymal stem cell culture supplement, the purpose of current study was to investigate the probable effects of umbilical cord blood platelet lysate (UCB-PL) in proliferation, survival and differentiation of cord blood mononuclear cells. Materials and Methods: The umbilical cord blood platelet lysate (UCB-PL) was added to cord blood mononuclear cells culture (1×10 6 /mL) in presence of FLT3L, TPO and SCF. The effective dose of UCB-PL, cell viability and differentiation of mononuclear cells were determined by trypan blue staining and colony assay method, respectively. The number of mononuclear cells was measured by flowcytometric analysis of CD133+ CD34+CD38- cells. Quantitative expression of CD 34 was performed by QRT-PCR method. Results: Combination of 5% of UCB-PL with mentioned cytokines yielded a 12-fold cell proliferation in comparison with control group. A higher concentration of UCB-PL showed cytotoxic effects. CD 34 also increased significantly in group of 5% UCB-PL treated cells. In this particular group, a significant increase of colony forming units granulocytes-erythroid-macrophages-megakaryocyte (CFU-GMMM) and granulocyte-macrophage (CFU-GM) were detected. Conclusion: Our results indicate that 5% UCB -PL can be used as a supplement in MNC cultured cells and in cord blood hematopoietic stem cells for cell therapy purposes.