اثر محيط رويي سلول‌هاي ملانوما A375 در القاي تغييرات بدخيمي و افزايش قابليت مهاجرت ملانوسيت‌هاي انساني

The effects of conditioned medium derived from A375 human melanoma cell line on induction of malignant transformation and increasing the migration ability of the human melanocytes

چكيده سابقه و هدف: سلول‌هاي سرطاني، مجموعه‌اي از فاكتورهاي مختلف را به محيط پيراموني خود آزاد مي‌كنند كه مي‌توانند به تغيير عملكرد سلول‌هاي موجود در ريز‌‌محيط تومور و همچنين سلول‌‌هاي دورتر از ناحيه‌ي توموري منجر شوند. هدف اين مطالعه، بررسي اثر محيط رويي حاصل از رده‌ سلولي ملانوما A375 بر ملانوسيت‌هاي انساني در شرايط آزمايشگاهي است. مواد و روش‌ها: محيط رويي از كشت 48 ساعته رده سلولي ملانوما A375 تهيه شد. ملانوسيت‌ها در گروه تست، در فلاسك T-25 كشت و به مدت 22 روز با محيط رويي حاصل از ملانوما A375 تيمار شدند. در گروه كنترل، همين تعداد سلول در حضور محيط كشت كامل (DMEM حاوي 10% FBS) كشت داده شدند. خصوصيات ريخت‌شناسي سلول‌ها با استفاده از ميكروسكوپ نوري معكوس بررسي و نرخ رشد سلول‌ها به كمك روش شمارش مستقيم سلول‌ها محاسبه شد. سپس ميزان بيان ژن‌هاي تشخيصي ملانوما (S100A4، S100A14، MITF و TYR) و ژن‌هاي مرتبط با فرآيند گذار از حالت اپيتليالي به حالت مزانشيمي (EMT) شامل CDH1، CDH2، SNAI1، SNAI2، TWIST1 و TGF-B1 به‌وسيله‌ي Real-Time PCR و ميزان مهاجرت سلول‌ها به كمك آزمون خراش، در هر دو گروه مورد بررسي قرار گرفت. از ملانوما A375، به‌عنوان كنترل مثبت استفاده شد. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه تيمار ملانوسيت‌ها با محيط رويي ملانوما A375، سبب تغيير شكل ملانوسيت‌ها، افزايش 62/1 برابري در ميزان تكثير اين سلول‌ها (001/0P=)، افزايش معني‌دار بيان ژن‌هاي S100A14 (003/0P=) و TGF-B1 (001/0P=)، كاهش معني‌دار بيان ژن CDH1 (048/0P=) و افزايش معني‌دار در قابليت مهاجرت اين سلول‌ها شد (05/0P < ). نتيجه‌گيري: بر اساس نتايج اين مطالعه، مولكول‌هاي آزادشده از رده سلولي ملانوما A375 ، مي‌توانند برخي از ويژگي‌هاي مولكولي و عملكردي ملانوسيت‌ها را در جهت القاي بدخيمي تغيير دهند.

Background and Aim: Cancer cells release a complex of different factors into their environment that can lead to functional changes in cells within the tumor microenvironment and also farther away from the tumor region. The aim of this study is in vitro evaluation of the effects of conditioned medium derived from A375 human melanoma cell line on the function of human melanocytes. Materials and Methods: The conditioned medium was prepared from A375 melanoma cell line after 48 hours of culture. Melanocytes in the test group were seeded in T-25 flask and treated with the conditioned medium for 22 days. The same number of melanocytes in the control group was cultured in complete medium (DMEM supplemented with 10% FBS). The morphological characteristics by using inverted light microscope, growth rate by direct cell counting, expression levels of melanoma diagnostic markers (S100A4, S100A14, MITF, TYR) and also epithelial-mesenchymal transition (EMT) related markers (CDH1, CDH2, SNAI1, SNAI2, TWIST1, TGF-B) by real-time PCR and migration rate by scratch assay, were studied in both groups. A375 melanoma cell line was used as a positive control. Results: The results showed that melanocytes treatment with A375-conditioned medium leads to alteration of the cells morphological characteristics, 1.62 fold increase in melanocytes proliferation rate, significant increase in S100A14 (*p=0.003) and TGF-B (*p=0.001) expression, a significant decrease in CDH1 (*p=0.048) gene expression and also increase in migration rate of the treated melanocytes (*p < 0.05). ‍Conclusion: Based on results of this study, secreted molecules derived from A375 melanoma cell line, can change the molecular and functional characteristics of melanocytes in order to induce malignant transformation.