انگيزش پينه و باززايي گياه از كشت رويان در پايه GF677

Callus Induction and Plant Regeneration from Embryo Culture in GF677 Rootstock

در اين پژوهش دستور كار كامل ريزافزايي GF677 از روش اندام زايي غيرمستقيم از كشت رويان شرح داده شد. بذرهاي بالغ GF677 پس از گندزدايي، به منظور شكستن نياز سرمايي در شرايط سترون در محلول 250 ميلي گرم در ليتر جيبرليك اسيد (GA3) با 5 تيمار زماني (0، 12، 24، 48 و 96 ساعت) و در دماي 3±25 درجه سلسيوس قرار گرفتند. ريزنمونه‌هاي رويان با دقت از لپه هاي بذرها جدا و جهت پينه زايي روي محيط كشت پايه موراشيگ و اسكوگ (MS) با تيمارهاي مختلف تنظيم كننده رشد كشت شدند. نتيجه ها نشان داد به طور كلي تيمار GA3 سبب افزايش پينه زايي از ريزنمونه ها شد كه اين اثر تنها در حضور 2، 4- دي كلروفنوكسي استيك اسيد (2,4-D) و بنزيل آدنين (BA) صورت گرفت. پينه ها به منظور اندام زايي روي محيط كشت داراي BA (0، 1، 2 و 4 ميلي گرم در ليتر) به همراه 25/0 ميلي گرم در ليتر نفتالن استيك اسيد (NAA) و 25/0 ميلي گرم در ليتر ايندول بوتيريك اسيد (IBA) منتقل شدند. بيشترين تعداد شاخه در هر ريزنمونه (60/16) در حضور 2 ميلي گرم در ليتر BA به دست آمد. تيمار بذرها در محلول GA3 سبب كاهش مقدار باززايي شاخه از پينه شد. جهت ريشه زايي ريزشاخه ها، سه نوع اكسين IBA، NAA و ايندول استيك اسيد (IAA) به غلظت هاي 0، 5/0، 1، 2، 4 و 8 ميلي گرم در ليتر در محيط كشت MS نيم قدرت بررسي شد كه به‌طور كلي بيشترين ريشه‌زايي در حضور IBA مشاهده شد. سازگاري گياهك هاي ريشه دار شده پس از انتقال به محيط خاكي در شرايط گلخانه 85% بود.

In this research, complete micropropagation protocol of GF677 has been described by indirect organogenesis from embryo culture. In order to break the chilling requirement, mature seeds after disinfection were treated with 250 mg-l of sterile solution of GA3 for different periods of time (0, 12, 24, 48, 96 h). Then, embryo explants separated carefully from the seeds and for callus induction were cultured in factorial experiment on Murashige and Skoog medium (MS) supplemented with different growth regulator treatments. The results showed, only in the presence of 2,4-D and BA, GA3 treatment increased callus induction of explants. Calluses were transferred on medium containing BA (0.0, 1.0, 2.0 and 4.0 mg-l) with 0.25 mg-l NAA and 0.25 mg-l IBA. The highest percentage rate of regeneration (90%) and the highest shoot number, (16.60) per explant were obtained in the presence of 2.0 mg-l BA. Seeds treatment with GA3 at this stage reduced regeneration of shoots from callus. For rooting of regenerated shoots, the effect of three types of auxin IBA, NAA and IAA in different concentrations (0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 and 8.0 mg-l) on 1/2MS medium were studied. The highest rooting index was observed in the presence of IBA. Rooted plantlets after transferred to the soil mixture (peat, perlite and sand, 2: 2: 1) acclimatized with 85% success in greenhouse condition.