تراريختي ريسه‌هاي قارچ چربي‌ساز Mortierella alpina با استفاده از سيستم تراريختي AMT (Agrobacterium Mediated Transformation)

Transformation of Mortierella alpina (fatty acid supplier) myceliums via AMT (Agrobacterium Mediated Transformation)

مقدمه: قارچ رشتهاي Mortierella alpina منبع غني از اسيدهاي چرب غيراشباع به خصوص آراشيدونيك اسيد است. اين ماده پيش ساز توليد تعدادي از ايكوزانوئيدهاست كه در رئولوژي خون، فعالسازي پلاكتها و عملكرد لوكوسيت ها و ويژگيهاي عملكردي غشاي سلولي نقش دارد. مواد و روشها: در اين مطالعه انتقال ژن بتا گلوكورونيداز به قارچ M. alpina CBS754/68 با استفاده از باكتريهاي Agrobacterium rhizogenes و Agrobacterium tumefaciens بررسي شد. باكتريهاي حاوي ناقلpBI121 براي تراريختي ريسه هاي قارچ استفاده شد. ريسه هاي سه روزه با سه تيمار يك، دو و سه ساعت در معرض قرارگيري سلولهاي باكتري در حضور استوسيرينگون به عنوان بافت هدف استفاده شد. پايداري ميتوزي تراژن تا نسل سوم (T2) در قارچهاي تراريخت با استفاده از رنگآميزي هيستوشيميايي GUS و واكنش زنجيرهاي پليمراز بررسي شد. نتايج: نتايج نشان داد بيشترين درصد تراريختي مربوط به باكتري A. tumefaciens و بيشترين پايداري ميتوزي در تراريختهاي حاصل از كاربرد A. rhizogenes است. بحث و نتيجهگيري: نتايج بهدستآمده نشان داد كه براي حصول نتيجه با بازده تراريختي بيشتر و پايدارتر استفاده از گونه مناسب Agrobacterium فاكتوري اساسي است. نوع گونه و سويه قارچ و شرايط آزمايش در انتقال ژن به اين روش بسيار مؤثر است. اين اولين گزارش براي تراريختي قارچ اتوتروف M. alpina با استفاده از Agrobacterium است.

Introduction: Mortierella alpina is one of the most important fungi in food industry because of having ability of synthesizing unsaturated fatty acids, particularly Arashidonic Acid. This is a precursor of Eicosanoidregulatelipoprotein metabolism which is involved in blood rheology, platelet activation and leukocytefunction, and the functional characteristics of the cell membrane. Materials and methods: In this study genetic transformation of M. alpina CBS754.68 fungus was evaluated via Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes. Agrobacteriums containing pBI121 vector were used for transformation of three days of old mycelia. Three days old hyphae were exposed to the bacteria with three level of time (one, two and three hours) in the present of acetosyringone. Mitotic stability of the third generation of transgenic (T2) was confirmed by GUS assay and amplification of CaMV 35S promoter by polymerase chain reaction. Results: The highest percentage of transformation and mitotic stability were obtained by using A. tumefaciens and A. rhizogenese, respectively. Discussion and conclusion: The results showed that to obtain more efficient and more stable transformation, the fundamental factor is the use of suitable species of Agrobacterium. It is the first report for transformation of autothroph strain of M. alpine via Agrobacterium.