جداسازي و شناسايي مولكولي باكتري لاكتوباسيلوس برويس از سركه بومي

Isolation and molecular identification of Lactobacillus brevis from traditional vinegar

مقدمه: سركه يك چاشني پرمصرف در سراسر جهان است كه از مواد اوليه و روشهاي متفاوت براي توليد آن استفاده ميشود. در ايران نيز انواع سركه هاي طبيعي با استفاده از ميوه هاي مختلف مانند انگور و سيب، بيشتر به صورت خانگي تهيه مي شود. سركه طبيعي داراي خواص بسيار زيادي است و طب سنتي ايراني اسلامي نيز مصرف آن را توصيه كرده است. سركه حاوي باكتريهاي اسيد استيك، اسيد لاكتيك و مخمر است. باكتريهاي اسيد استيك و مخمرها در توليد سركه نقش دارند و باكتريهاي اسيد لاكتيك باعث بهبود طعم آن ميشوند. هدف اين پژوهش جداسازي و تعيين هويت باكتريهاي اسيد لاكتيك از سركه سنتي بهويژه لاكتوباسيلوس برويس بهمنظور ارزيابي ميزان توليد گاما آمينوبوتريك اسيد (گابا) است. مواد و روشها: نمونه هاي سركه سنتي شامل يك نمونه سركه سيب و دو نمونه سركه انگور، در محيط كشت مخصوص باكتريهاي اسيد لاكتيك (MRS) كه به آن آنتي بيوتيك نيستاتين اضافه شد و كشت داده شد. با انجام تعدادي از آزمايشهاي تشخيصي از جمله آزمايش كاتالاز، و تخمير برخي از كربوهيدراتها، رشد در دما، pH و غلظتهاي متفاوت نمك، حضور لاكتوباسيلها بررسي شد و درنهايت با تكثير ژن s r DNA 16 و تعيين توالي، پنج گونه لاكتوباسيلوس شناسايي شدند. نتايج: از سه نمونه سركه سنتي، دوازده جدايه لاكتوباسيلوس جداسازي شد. همه باكتريهاي جداشده كاتالاز منفي و گرم مثبت بودند و در pHهاي 5/4 و 5/6 و در غلظتهاي 2، 4 و 5/6درصد نمك رشد كردند. اغلب باكتريها در دماي 15 درجه سانتيگراد رشد كردند. جدايه شماره 12 در دماي 45 درجه سانتيگراد نيز رشد كرد. آزمايشهاي بيوشيميايي، حضور لاكتوباسيلوس پلانتارم و لاكتوباسيلوس برويس نمونه هاي مطالعه شده را نشان دادند. نتيجه تعيين توالي وجود سه جدايه لاكتوباسيلوس برويس را تأييد كرد. بحث و نتيجه گيري: لاكتوباسيلوس پلانتارم و لاكتوباسيلوس برويس در سركه هاي بومي بررسي شده تشخيص داده شد. هرچند جداسازي لاكتوباسيلوس پلانتارم از سركه قبلاً گزارش شده است، جداسازي لاكتوباسيلوس برويس از سركه براي اولين بار گزارش ميشود.

Introduction: Vinegar is a popular condiment in the world that different materials and methods have been used to produce it. In Iran natural vinegar is also prepared mostly in a traditional way by using different fruits such as grapes and apples. Natural vinegar has beneficent properties and because of this, it is recommended to be used by traditional and Islamic medicine. Vinegar contains acetic acid bacteria, lactic acid bacteria and yeast. Acetic acid bacteria and yeasts are involved in the production of vinegar and lactic acid bacteria improve the flavor of vinegar. The aim of this study was isolation and identification of lactic acid bacteria especially Lactobacillus brevis from traditional vinegar. Materials and methods: After collecting a few traditional vinegars, the vinegar samples cultured for isolation of lactic acid bacteria on MRS broth and agar media contained nystatin as an antiyeast antibiotic. Then some microbiological tests including catalase, gram staining and fermentation of carbohydrates were performed. Then, they were cultured at different temperatures, pH and different concentrations of salts. Finally, three isolates bacteria with biochemical properties of Lactobacillus brevis were evaluated by16 srDNA gene amplification. Results: Twelve lactobacilli were isolated from three vinegar samples. All isolated bacteria were catalasenegative and grampositive. They could be able to grow at pH around 4.5 and 5.6, and at 2, 4 and 5.6% of salt concentrations. Most of the bacteria grew at 15oC, whereas one isolated grew at 45oC. Sequencing and Blast results showed that the three strains are Lactobacillus brevis. Discussion and conclusion: Lactobacillus brevis and Lactobacillus plantrum were found in traditional vinegars. Although isolation of Lactobacillus plantrum from vinegar was reported previously, as far as we could determine, it is for the first time that we could isolate Lactobacillus brevis from vinegar.