تأثير ويتامين B12 در رقيق كننده بر پايه تريس بر حفاظت اسپرم قوچ زل

The effect of vitamin B12 on bases of Tris extender on protection of Zel ram spermatozoa

سابقه و هدف: ويتامين B12 از ويتامين هاي محلول در آب است كه در فرآيند اسپرماتوژنسيز و بقاي عملكرد طبيعي اسپرماتووزا ضروري است. در حال حاضر اطلاعات اندكي در خصوص مكمل ويتامين B12 بر كيفيت سيمن منجمد شده موجود است. بنابراين هدف از انجام اين پژوهش، بررسي تأثير سطوح مختلف ويتامين B12 بر كيفيت اسپرم قوچ زل در شرايط پيش و پس از انجماد بود. مواد و روشها: مايع مني از شش رأس قوچ سالم و بالغ با ميانگين وزني 5±55 كيلوگرم و سن 3-2 ساله با استفاده از شوكر الكتريكي اخذ شد و نمونه هاي مناسب با رقيق كننده تريس به نسبت 1 به4 مخلوط و پس از سردسازي تا دماي 4درجه سانتي گراد، ارزيابي شدند. سپس، پايوتهاي 25/0 ميلي ليتري با مايع مني رقيق شده پر و ابتدا در ازت مايع در دماي 120- درجه سانتيگراد به مدت 8-6 دقيقه قرار داده شد و سپس، در ازت مايع در دماي 196- درجه سانتيگراد، منجمد و نگهداري شدند. پس از مدت زمان 10 روز، پايوتها در دماي 37 درجه سانتيگراد يخ گشايي شدند و ويژگيهاي زنده ماني، تحرك، حركت پيشرونده، درصد ناهنجاريهاي مورفولوژيكي، نقايص آكروزومي، درصد اسپرم طبيعي، يكپارچگي غشا پلاسمايي و درصد بازيابي زنده ماني و تحرك اسپرماتوزوا با استفاده از رنگ آميزي و ارزيابي ميكروسكوپي انجام شد و ميزان آنزيم هاي آنتي اكسيدانتي كاتالاز، گلوتاتيون پراكسيداز و سوپر اكسيد ديسموتاز مني نيز، اندازه گيري شد. اين پژوهش، در قالب طرح كاملاً تصادفي با چهار تيمار شامل سطوح مختلف ( صفر، 1، 2 و 3 ميلي گرم بر ميلي ليتر) ويتامين B12 با هشت تكرار انجام شد. داده هاي حاصل از اين آزمايش، با استفاده از نرم افزار SPSS نسخه 18، مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت. يافته ها: نتايج نشان داد كه تأثير ويتامين B12 بر پارامترهاي حياتي اسپرم از جمله درصد زنده ماني، حركت پيشرونده، يكپارچگي غشا پلاسمايي، نقايص آكروزومي و درصد اسپرم طبيعي در شرايط سردسازي تا 5 درجه سانتيگراد و شرايط پس از انجماد معني دار بود (05/0p نتيجه گيري: ميتوان پيشنهاد نمود كه از سطح 2 ميلي گرم بر ميلي ليتر ويتامين B12 در رقيق كننده تريس، مي توان براي محافظت اسپرم و جلوگيري از آسيب هاي ساختاري ناشي از راديكال هاي آزاد و پراكسيداسيون ليپيد و بهبود فعاليت آنزيم هاي آنتي اكسيدانتي در طي فرآيند انجماد- يخ گشايي مني قوچ زل استفاده نمود.

Background and objectives: Vitamin B12 is water-soluble vitamins that are essential in the process spermatogenesis and survival of normal function. We have little information about supplementation of vitamin B12, on quality of frozen semen. So the aim of this study was to investigate the effects of different levels of vitamin B12 on semen quality of Zel ram spermatozoa in pre and post freezing conditions. Materials and methods: Samples were collected from 6 healthy and mature rams with 55± 5 Kg body weight and 2-3 years old by using electro-ejaculator. Suitable samples were mixed with Tris extender in a ratio of 1:4 semen and after cooled to 5-0 0C was assessed. Then, 0.25 ml of straws was filled with diluted semen. At first, straws put upper vapor liquid nitrogen for 6-8 min, then kept and frozen in -196oC. After 10 days straws were thawed in 37oC and viability, motility, progressive motility, morphological defects, acrosomal defects, normal spermatozoa, plasma membrane integrity and recovery rate of viability and motility of spermatozoa by using staining and microscopic evaluation was performed and the antioxidant enzymes catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase of semen were measured. This experiment was carried out on the basis of completely randomized design with 4 treatments including levels of vitamin B12 (0, 1, 2 and 3 mg/mL) and 8 replications. The data from these tests was analyzed by using SPSS software, version 15. *Corrresponding author; a.tahmasbi@lycos.com نشريه پژوهش در نشخواركننذگان )4 ،)شماره )3 )5395 95 Results: Results showed that effect of vitamin B12 on vital parameters of spermatozoa such as viability, progressive motility, membrane integrity, defect acrosome and normal spermatozoa at cooled to 5oC and post frozen conditions were significant (p< 0.05) and the highest percentages of these parameters were observed in extender with 2 mg/mL vitamin B12. On the one hand the use of vitamin B12 in extender, could improve recovery rate of motility and viability percentages of spermatozoa. It also led to an increase in antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase of semen and the least of these enzymes in the control group and the highest level of these enzymes in 2 mg/ ml of vitamin B12 in Tris extender were obtained, but did not lead to increase glutathione peroxidase activity than the control of group. Conclusion: Therefore, it could be suggested that the level of 2 mg /ml, vitamin B12 in Tris extender can be used to protect spermatozoa and prevent structural damage caused by free radicals and lipid peroxidation and improve antioxidant enzyme activity in the process of frozen thawed of Zel ram semen.