طراحي، ساخت و تاييد مولكولي سازه جفتي بيان كننده ژن MaSp1 و بيان گذراي آن در الياف پنبه

پنبه L.) Gossypium hirsutum) از محصولات مهم زراعي دنيا است و افزايش كيفيت الياف آن از اهميت فراواني در صنايع نساجي برخوردار است. رشته­ هاي تار عنكبوت محكم­ترين و كشسان­ترين الياف شناخته شده در طبيعت است. بدين جهت سازه­اي طراحي شد تا با بيان ويژه پروتئين تار عنكبوت در الياف پنبه منجر به افزايش كيفيت آن جهت ريسندگي شود. پس از سنتز سازه مورد­نظر كه تركيبي از پروموتر ويژه بيان در فيبر پنبهRD22-like1 ، توالي كوزاك مانند در گياهان و توالي مصنوعي بر­اساس ژن Lh Major ampullate Spidroin1 (MaSp1) بود، پلاسميد مورد نظر توسط دو آنزيم EcoRI و NheI برش دوگانه داده شد و پس از استخراج قطعه مورد­نظر بين جايگاه ­هاي برش EcoRI و NheI دروكتور باينري pCAMBIA1304 همسانه­ سازي شد. پس از تراريختي E.coli DH5 α توسط اين پلاسميد و استخراج آن، پلاسميد جديد pCSP نام­گذاري شد. با واكنش زنجيره­اي پليمراز توسط پرايمر اختصاصي ژن مورد نظر و ژن مقاومت به هيگرومايسين و همچنين برش آنزيمي دوگانه صحت واكنش اتصال به تاييد رسيد. پس از تراريختيAgrobacterium tumefaciens LBA4404 توسط pCSP، صحت تراريختي با واكنش زنجيره­اي پليمراز تاييد شد. سپس تخمك پنبه رقم ورامين توسط آن ترايخته شد و با اثبات بيان ژن MaSp1 در تخمك و الياف پنبه در محيط در شيشه مشخص ­شد پروموتر GaRDL1 كه متعلق به گونه ديگري از پنبه است به­خوبي توان كنترل بيان ژن مورد نظر در الياف پنبه را دارد و توالي ژن سنتزي بدون بهينه­سازي كدون در الياف پنبه قابل بيان مي­باشد.