طراحي، ترانسفورماسيون و تكثير ايزوفرم نوتركيبVEGF111b در E. coli Top10 براي توليد داروي نوتركيب

سابقه و هدف: سنتز پروتئين­هاي نوتركيب با خاصيت مهار گيرنده­ هاي رشد در تومورهاي سرطاني يكي از راه­ هاي جديد درمان سرطان است. هدف مطالعه حاضر طراحي و كلون ايزوفرم نوتركيبVEGF111b در وكتور pBudCE4.1 و بررسي سازگاري اين سازه با باكتري E. coli Top10 جهت توليد داروي نوتركيب است. مواد و روش ­ها: ايزوفرم جديد VEGF111b با استفاده از توالي­هاي موجود در بانك­هاي ژني و نرم­افزار 7 oligoطراحي شده و توسط آنزيم­هاي BGLII و KpnI بريده شده و در پايين دست پروموتور EF-1 در وكتور pBudCE4.1 كلون شد. وكتور نوتركيب pBud.VEGF111b توسط روش كلريد كلسيم در باكتري E. coli Top10 ترانسفورم شد. جداسازي باكتري­ هاي نوتركيب در محيط LBA حاوي غلظت 3/0 و 5/0 درصد آنتي­بيوتيك زئوسين انجام شد. در مرحله آخر وكتور نوتركيب با استفاده از كيت استخراج DNA از ژل (Thermo K0513) استخراج شده و وجود قطعه نوتركيب VEGF111b توسط هضم آنزيمي و تعيين توالي تائيد شد. نتايج: الحاق قطعه 111b در جايگاه مورد نظر تائيد شد. تمامي كلوني­هاي E. coli Top10 مشاهده شده در محيط حاوي غلظت 0/5 درصد زئوسين حاوي قطعه نوتركيب VEGF111b بودند و در غلظت 0/3 درصد زئوسين، 61/9 درصد كلوني نوتركيب مشاهده شد. وجود تواليVEGF111b در باكتري ­هاي نوتركيب توسط هضم آنزيمي و تعيين توالي تائيد شد. نتيجه گيري: مطالعه حاضر گامي مهم در جهت توليد داروي نوتركيبVEGF111b و بررسي عملكرد ضد سرطاني اين پروتئين است. وكتورpBudCE4.1 با دارا بودن 2 جايگاه كلونينگ و 8 جايگاه برش آنزيمي كانديد مناسبي براي كلونينگ و بيان پروتئين­ هاي نوتركيب در E. coli Top10 است.