شناسايي ژن aph(3)-IIIa مقاوم به استرپتومايسين در ايزوله هاي جداشده از بيماران شهر تهران با روش مولكولي PCR

Identification of Streptomycin Resistance Gene Among Enterococcus spp. Isolated from Hospitals of Tehran by PCR

زمينه و اهداف: انتروكوك ها به صورت فلور نرمال در دستگاه گوارش انسان و بسياري از پستانداران وجود دارند . امروزه افزايش شيوع انتروكوك هاي مقاوم به آمينوگليكوزيدها در بيمارستان هاي سراسر جهان يك مشكل مهم به شمار مي آيد. در انتروكوك ها ژن aph(3)-IIIa نقش اصلي در پيدايش مقاومت نسبت به استرپتومايسين بازي مي كند. هدف ازانجام اين مطالعه شناسائي اين ژن در انتروكوك هاي جداشده از بيماران شهر تهران به روش PCR مي باشد. مواد و روش كار: در اين مطالعه ۳۵۰ نمونه باليني مختلف در طي سال هاي ۱۳۹۲-۱۳۹۳ از بيمارستان ميلاد،امام خميني ،بقيه الله (عج) جمع آوري شد. گونه هاي انتروكوك بر اساس تست هاي بيوشيميايي و كشت در محيط هاي اختصاصي تعيين هويت گرديدند، سپس جهت تعيين الگوي مقاومت دارويي ايزوله هاي انتروكوك ها به آنتي بيوتيك هاي مختلف، روش ديسك ديفيوژن بر اساس معيار CLSI انجام پذيرفت. در ادامه براي شناسايي ژن هاي مقاومت نسبت به استرپتومايسين از پرايمر aph(3)-IIIa در روش مولكولي PCR استفاده شد. يافته ها: از ميان ۱۵۰ نمونه، ۸۷ مورد (۵۸%) انتروكوك فكاليس و ۶۳ مورد (۴۲% ) انتروكوك فاسيوم گزارش شدند. در تست آنتي بيوگرام، سويه ها، مقاومت بالايي نسبت به تتراسايكلين و اريترومايسين از خود نشان دادند و كمترين مقاومت نسبت به دو آنتي بيوتيك كلرآمفنيكل و وانكومايسين بود. هم چنين مقاومت چندگانه در اكثر سويه ها مشاهده گرديد و ميزان فراواني ژن aph(3)-IIIa ۲۲/۲% بود كه اكثر انها مقاوم به استرپتومايسين بودند. نتيجه گيري: از اين مطالعه مي توان نتيجه گرفت عامل اصلي مقاومت به آنتي بيوتيك استرپتومايسين وجود اين ژن aph(3)-IIIa در سويه هاي انتروكوك فاسيوم و فكاليس است كه رفته رفته در بيمارستان هاي شهر تهران در حال گسترش است، لذا تشخيص سريع اين نوع مقاومت ها با روش مولكولي PCR مي تواند راهي براي جلوگيري از گسترش عفونت هاي ناشي از اين باكتري باشد.

Background and Aim: Enterococci are normal flora and present in the intestinal tract of humans and many mammals. Today, the increasing prevalence of resistant enterococci to aminoglycosides is a major problem in hospitals around the world. In Enterococci, aph (3 ) IIIa gene plays a major role in the emergence of resistance to streptomycin. The aim of this study was to identify this gene in enterococci isolated from patients using PCR method in Tehran. Materials and Methods: In this study, 350 clinical samples were collected from Milad, Imam Khomeini, and Baghiyatallah hospitals during the years 20152014. Enterococcus species were identified based on specific biochemical tests and culture. Then, disk diffusion method was performed according to CLSI guidelines to determine the drug resistance of Enterococcus isolates to different antibiotics. The following primer to streptomycin resistance genes, aph (3 ) IIIa was used in the PCR method. Results: Among the 150 samples, 87 samples (58%) were reported as Enterococcus faecalis, and 63 (42%) as Enterococcus faecium. In Antibiotic test, strains showed high resistance to tetracycline and erythromycin whereas the least resistance was observed to chloramphenicol and vancomycin, respectively. The high resistance to Streptomycin was in 22.2% strains which included aph (3) IIIa gene. Conclusions: The results of this study can be concluded that the presence of aph (3) IIIa gene is the main cause of antibiotic resistance to streptomycin in Enterococcus faecium and E. faecalis strains that is growing gradually in the hospitals in Tehran. Therefore, early detection of this type of resistance with the PCR method could be the best way to prevent the spread of infections caused by this bacterium.