بررسي پاسخ آنتي بادي هاي منو كلونال بر عليه آنتروتوكسين اپسيلون كلوستريديوم پرفرينجنس

Monoclonal antibodies responses against Enterotoxin of Clostridium perfringens using macro techniques culture

كلوستريديا پرفرينجنس باكتري بي هوازي است كه با تر شح توكسين اپسيلون منجر به بيماري كشنده آنتروتوكسيمي در دام مي شود ، در اين مطالعه اثر سيتوتوكسيسيته دو منو كلونال آنتي بادي خنثي كننده،4D7 و5B7 بر عليه توكسين اپسيلون بررسي شد. بدين منظور باكتري كلوستريديا پرفرينجنس بر روي سلول تهيه شده از كليه سگ( Madin, MDCK (Derby Canine Kidney كشت داده شد. و سلول ها بوسيله 7 استينو دي آمين رنگ آميزي شدند و دو منوكلونال به آن افزوده و در انكوباتور قرار داده شد. دو آنتي بادي منو كلونال 4D7 و 5B7 از تشكيل منافذ در غشاي سلولي MDCK ممانعت نمودند. به كمك آناليز توكسين هاي موتانت و دو آزمون الايزاي رقابتي و آرايه پپتيدي، به كمك آنتي بادي منو كلونال 4D7آمينو اسيدهاي 145،134 تشخيص داده شد. و نيز نشان داده شد كه آنتي بادي هاي منو كلونال خنثي كننده سبب تشخيص اپي توپ ديگري هم در نزديكي اين ناحيه مي باشند اين ناحيه از آمينو اسيدهاي145،134 تشكيل شده است كه حلقه مولكول پروتئين آمفي پاتيك الحاقي با غشاي توكسين هم پوشاني دارند تعيين هويت و مشخص كردن اپي توپ هاي شناخته شده توسط آنتي بادي هاي خنثي كننده نخستين گام مهم در روند توسعه درمان عوامل بيماريزا و نيز قابل استفاده در مواجهه با اثر توكسين اپسيلون كلوستريدياها در آينده نزديك مي باشد.

Clostridia pererfringens is anaerobic bacteria with sécrétion epsilon toxin that causes lethal enterotoxaemia in animals. In this study, cytotoxicity effects of two monoclonal neutralizing antibodies 4D7 and 5B7 were evaluated against epsilon toxin using an in vitro technique with staining MDCK cell culture. The effects of inhibitory of two monoclonal antibodies neutralize epsilon toxin of clostridia that were cultured on Madin Derby canine Kidney cells, MDCK cells by staining 7actinodiamine dye. It was showed that the two neutralizing antibodies inhibited the pore forming activity of epsilon toxin and reduced the epsilon toxin bound to MDCK cells at 4oC. Epitopes, the two major 134, 145 amino acids were recognized by antibodies that neutralized the activities of epsilon toxin, By Competitive ELISA and microarray tests via that monoclonal antibody 4D7 were also diagnosed and analyzed134 and 145 epitopes It was shown that an amphipathic protein molecule was coated with toxin membrane. Therefore, this valuable information may be used in the development antitoxin therapies in the near future time.