مطالعه كاهش حدت نئوسپورا كنينوم بعد از پاساژهاي متوالي روي رده سلولي J774

Study on the attenuation of Neospora caninum after continuous passage on J774 cell line

هدف از اين مطالعه، ايجاد تخفيف حدت در تك ياخته ي نئوسپورا كانينوم (Neospora caninum) از طريق پاساژ متوالي روي رده سلولي J774 و ارزيابي ميزان حدت آن در موش BALB/c بود. ايزوله شماره يك نئوسپورا كانينوم بر روي رده سلولي J774، 90 مرتبه پاساژ داده شد تا سوش تخفيف حدت يافته توليد شود؛ سپس 35 سر موش BALB/c ماده با متوسط سن شش تا هشت هفته به صورت تصادفي به هفت گروه پنج تايي تقسيم شدند. به گروه اول به عنوان شاهد فقط محيط كشت، به گروه دوم و سوم و چهارم سوش حاد Nc1 با دوزهاي 106×5، 106×10 و106×20 و به گروه پنجم، ششم و هفتم سوش تخفيف حدت يافته Nc1 با دوزهاي106×5، 106×10 و106×20 به صورت زير جلدي تزريق شد. تمامي موش ها به صورت روزانه بررسي و نشانه هاي بيماري و تلفات احتمالي موش ها ثبت گرديد. در اين مطالعه ايمني سلولي با آزمايش جلدي و ايمني هومورال با آزمايش الايزا بررسي شد. نتايج اين مطالعه نشان داد موش هايي كه سوش تخفيف حدت يافته را دريافت كرده بودند، نه تنها تلف نشدند بلكه علائم بيماري را نيز نشان ندادند. به علاوه پاسخ ايمني هومورال و سلولي نيز در آن ها نسبت به گروه هاي دريافت كننده سوش حاد به طور معني داري بالاتر بود. در جمع بندي نهايي اين مطالعه نشان داد كه با استفاده از رده سلولي J774 كه يك سلول دفاعي مي باشد، مي توان به طور معني داري بيماري زايي سوش حادNc1 را كاهش داد؛ لذا اين روش مي تواند روش مناسبي براي تحقيقات آتي در راستاي دستيابي به واكسن زنده تخفيف حدت يافته باشد.

The aim of this study was to establish attenuated Neospora caninum (NC-1) tachyzoites through serial passage by J774 cell line. The virulence of attenuated tachyzoites for Balb/c mice was also evaluated. The NC-1 isolates were passaged 90 times in J774 cell line to produce a high-passage or attenuated strain. A total of 35 female BALB/c mice with an average age of six to eight weeks were randomly separated into seven groups. The first group as a control was inoculated subcutaneously with cell culture media and the second, third and fourth groups received low passage or acute NC-1 strain with different doses (5×106, 10×106, 20×106) of tachyzoites. The other three groups were inoculated with high-passage of NC-1 tachyzoites with similar doses. The mortality rate and pathological changes in all groups were noted daily. The cellular and humoral immunity were assessed by Skin test and ELISA, respectively. The results of the present study showed that the groups that received high-passage strain of Nc1 not only survived, but did not show pathological changes of neosporosis. In addition, cellular and humoral immune responses to NC-1 were significantly higher in mice that received high-passage tachyzoites of NC-1. These findings indicated that the serial passages of NC-1 in J774 cell line significantly led to decrease the virulence of NC-1. This attenuated tachyzoite could be used as a candidate for further research to develop live vaccines against Neospora caninum.