مقايسه ي غيرفعال سازي ويروس سندرم لكه سفيد ميگو به روش پرتوتابي الكترون و تيمار با فرمالين

Comparison of White Spot Syndrome Virus Inactivation by Electron Irradiation and Formalin Treatment

ويروس سندرم لكه سفيد يكي از عوامل بيماري زاي مهم در صنعت پرورش ميگو است. اين ويروس نه تنها در ميگو بلكه در ساير سخت پوستان وجود دارد. نمونه هاي ميگوي عفوني از جنوب ايران جمع آوري، و از نظر وجود ويروس سندرم لكه سفيد با استفاده از آزمون Nested PCR بررسي شدند. ويروس از ميگوهاي عفوني شده به روش سانتريفوژ خالص سازي، و از راه مشاهده با ميكروسكوپ الكتروني تاييد شد. تيتراسيون ويروس (دز كشنده ي 50%) در پست لاروهاي يك گرمي ميگو ببري سبز در دوره ي 8 تا 10 روزه انجام شد. غيرفعال سازي ويروس به روش پرتوتابي با استفاده از شتاب دهنده ي الكترون با انرژي 10MeV و تيمار با فرمالين انجام شد. دز كشنده ي 50% ويروس زنده و ويروس هاي پرتوتابي شده به روش كربر محاسبه، منحني دز/پايندگي با استفاده از نرم افزار Origin6 ترسيم، و ارزش D10 محاسبه شد. ويروس۱۰5/4دز كشنده ي 50% در هر ميلي ليتر، و دز بهينه ي الكترون براي غيرفعال سازي اين ويروس 13KGy به دست آمد. اين آنتي ژن ويروسي پرتوتابي شده مي تواند در آينده براي ارزيابي سيستم ايمني ميگو استفاده شود.

White spot syndrome virus is a major pathogen in cultured penaeid shrimp industries. The virus not only is present in shrimp but also occurs in marine crustaceans. The infected shrimp samples were collected from south of Iran and the infection was confirmed by Nested PCR. WSSV was isolated from the infected samples by centrifugation and filtration and multiplied in crayfish by intramuscular inoculation. WSSV was purified from the infected crayfish haemolymph by sucrose gradient and ultracentrifuge, and then confirmed under electron Microscopy. In vivo virus titration was made in Penaeus semicu/catus in a period of 8-1 0 days, and calculated as LDso. WSSV was inactivated by the I 0-Me V electron accelerator and formalin treatment. The LDso ofthe live virus and the irradiated virus samples were calculated by the Karber method. The dose survival curve for the irradiated and non-irradiated virus samples was drawn by Origin 6.1 software and D10 Value factor was calculated according to the curve. In vivo titration of the live virus stock obtained was I 0 5·4 LDsol ml and the optimum dose of the electron beam for inactivation of WSSV was obtained as 13 kGy. The inactivated, irradiated WSSV antigen can be used for the evaluation of shrimp immune response in the near future.