تعيين گـروه‌هاي سازگاري رويـشـي در جمعيت قارچ Botrytis cinerae با استـفاده از جهش يافته‌هاي sul

Determination of Vegetative Compatibility Groups (VCGs) in Botrytis cinerea populations using Sulfate non utilizing mutant (sul)

در اين تحقيق ساختار جمعيت قارچ tel: Botrytinia fakelianae) Botrytis cinerea از طريق بررسي گروه‌هاي سازگاري رويشي (VCG) با استفاده از جهش يافته‌هاي sul كه قادر به استفاده از يون سولفات نيستند مورد ارزيابي قرار گرفت. براي اين منظور 26 جدايه قارچ B.cinerea از ميزبان‌هاي صيفي و سبزي از گلخانه‌هاي منطقه ورامين جمع‌آوري شد. نمونه‌ها پس از شناسايي، به منظور خالص‌سازي تك اسپور شده و روي محيط كشت اختصاصي BSM كشت شدند. به‌منظور بررسي گروه‌هاي سازگاري رويشي (VCG) جدايه‌ها، روي محيط كشت پايه Vogel's حاوي سديم سلنات (يك تا سه گرم در ليتر) رشد داده شدند. سلنات يك تركيب سمي و آنالوگ سولفات بوده و قارچ‌ها قادر به استفاده از آن نيستند. جهش يافتگان مقاوم به سلنات در اين محيط به صورت سكتورهايي با رشد سريع كه از حاشيه كلني خارج شده بودند مشاهده شدند. جهش‌يافتگان سپس به‌منظور تأييد به محيط كشت پايه (MM:Minimmal Media) منتقل و خصوصيات رشدي آن‌ها مورد ارزيابي قرار گرفت. جهش‌يافتگان اكسوتروفي كه داراي رشد تنك روي محيط كشت پايه و داراي رشد وحشي روي محيط كشت پايه همراه با ال- متيونين بودند به‌عنوان جهش‌يافتگان sul تعيين شدند. پس از اطمينان از بروز جهش بر اساس الگوي رشد اكسوتروف روي محيط كشت پايه، جهش‌يافتگان sul به‌منظور تعيين فنوتيپ به محيط حاوي پتاسيم كرومات منتقل شدند. جدايه‌هايي كه قادر به رشد روي اين محيط بودند مقاوم به پتاسيم كرومات و در غير اين‌صورت حساس به پتاسيم كرومات تعيين فنوتيپ شدند. در نهايت به‌منظور تعيين گروه‌هاي سازگاري رويشي جهش يافتگان حساس به پتاسيم كرومات از يك جدايه در مقابل جهش يافتگان مقاوم به پتاسيم كرومات از جدايه ديگر قرار داده شد. محل تماس دو جدايه از نظر رشد پروتروفيك (نشان دهنده سازگاري) و يا وجود شكاف (نشان دهنده ناسازگاري) بعد از يك‌ماه مورد بررسي قرار گرفت. جدايه‌هايي كه در محل تماس رشد پروتروفيك از خود نشان دادند، سازگار و در يك گروه سازگاري رويشي قرار داده شدند. در نهايت از مجموع 26 جدايه مورد بررسي تعداد 15 گروه سازگار رويشي تعيين شد، گروه‌هاي سازگاري رويشي با نوع ميزبان و مناطق جمع‌آوري شده همبستگي نداشتند.

In this research population structure of Botrytis cinerea (tel: Botryotinia fuckeliana) determined by vegetative compatibility groups (VCGs) using sulfate non utilizing mutants (sul). For this purpose 26 isolates of B. cinerea were collected from different hosts in Varamin county greenhouses. All isolates identified and purified by single spore method and cultured on BSM medium. In order to determine the vegetative compatibility groups, all isolates were cultured on Vogel's basal medium amended with sodium seleanate (1-3 gr/lit). Selenate is a toxic substance for fungi and it is an analogue for sulfate in fungal metabolic pathway. Selenate-resistant mutants were isolated from all strains as spontaneous, fast- growing sectors arising from restricted colonies on medium amended with sodium selenate. Sectors were sulphate non-utilizing (sul) mutants if grew as thin expansive colonies with little or no aerial mycelium on MM (minimal media), but similarly to the wild-type on L-methionine- amended MM medium. MM amended with potassium chromate also used for partial phenotyping of sul mutants. Mutants that grew on MM amended with potassium chromate were chromate-resistant. Also mutants with inability for growing on this medium were indicated as chromat sensitive. In order to evaluation of vegetative compatibility groups (VCGs), chromate resistance and chromate sensitive mutants were paired in all possible combinations. All plates were monitored for formation of dense aerial mycelia (prototrophic growth pattern) at the contact zone of each two isolates up to 30 days. Isolates were assigned in the same vegetative compatibility group if represented prototrophic growth pattern along their contact zone. Among 26 isolates of B. cinerea, 15 VCGs were determined. No correlations were observed between VCGs with hosts and geographic origins of isolates.