شناسايي مولكولي قارچ¬هاي توليد كننده 8-كتو تريكوتسين همراه با بذر روناس و رديابي ژن¬هاي سنتزكننده دي¬اكسي نيوالنول در آنها با استفاده از PCR

Molecular identification of fungi trichothecens producing in seeds madder and detection of their nivalenol gene synthesis using PCR

روناس (Rubia tinctorum) یكی از محصولات مهم زراعی با مصارف دارویی و صنعتی در استان یزد می¬باشد. به منظور شناسایی قارچ¬های همراه با بذور روناس و تولید كننده توكسین، طی سال¬های زراعی 91 لغایت 93 از بذور روناس در مناطق مهم كاشت آن در استان یزد شامل اردكان و بافق نمونه¬برداری به عمل آمد. پس از كشت و خالص¬سازی جدایه¬های قارچی در محیط¬های كشت¬های سیب زمینی دكستروز آگار (PDA) و برگ میخك آگار (CLA)، شناسایی تكمیلی با آغازگرهای اختصاصی هر گونه با استفاده از واكنش زنجیره¬ای پلیمراز صورت گرفت. ردیابی قارچ¬های دارای پتانسیل تولید مایكوتوكسین 8-كتوتریكوتسین از جمله دی اكسی نیوالنول (DON) از طریق آغازگرهای اختصاصی ژن Tri13 انجام شد. جهت تأیید پتانسیل تولید مایكوتوكسین DON در جدایه¬های فوزاریوم از كروماتوگرافی مایع با كارایی بالا (HPLC) استفاده شد. در مجموع 249 جدایه قارچی از بذور روناس جداسازی شد كه متعلق به شش جنس قارچی شامل فوزاریوم، آسپرژیلوس، پنیسلیوم، آلترناریا، رایزوكتونیا و رایزوپوس بودند كه بیشترین فراوانی قارچ¬های جداسازی شده مربوط به فوزاریوم با 71 درصد كل جدایه¬ها بود. در بین قارچ¬های فوزاریوم، گونه¬های F.solani (55 جدایه) و F.oxysporum (41 جدایه) بیشترین فراوانی را داشتند. گونه¬های F. poae، F. semitectum و F. equiseti توانایی تولید دی اكسی نیوالنول را دارا بودند. ژن Tri13مؤثر در تولید دی اكسی نیوالنول نیز در این سه گونه ردیابی گردید و در آزمایش HPLCهمه قارچ¬های فوزاریوم مورد بررسی پتانسیل تولید مایكوتوكسین مورد نظر را داشتند.

Madder is one of the most important crops that used for medical and industrial applications and is widely cultivated in Yazd province. During 2012, sampling was done form seeds madder in important areas planted in Yazd province, including Bafq and Ardakan. After culturing and purification of fungal isolates in PDA and CLA media, additional identification was performed by PCR with specific primers for each species. Detection of fungi mycotoxins producing potential such as Nivalenol (NIV) using Tri13 primers was done. High-performance liquid chromatography (HPLC) was used to confirm the produce NIV mycotoxins potential in Fusarium species. 249 fungal strains were isolated from madder seed belonging to 6 genera of fungi including Fusarium spp., Aspergillus spp., Penicillium spp., Alternaria spp., Rhizoctonia solani and Rhizpous spp., that Fusarium isolates with 71 percent was the most frequency among fungi isolated. Among Fusarium fungi isolated, F. solani (55 isolates) and F. oxysporum (41 isolates) were the most frequency. F. poae, F. semitectum and F. equiseti ability to produce mycotoxins such as Nivalenol (NIV) that are harmful to human health and animals as well as effect on the quantity and quality of madder color production. Tri13 gene involved in production NIV was detected in three Fusarium species that all isolates produce NIV. The results of HPLC showed that all studied Fusarium fungi, have the potential to produce NIV mycotoxins. The results of this study showed that fungi associated with seeds madder are able to produce trichothecene mycotoxins that they can be dangerous for consumers. Given that, this is the first report of fungi mycotoxins producing on seeds madder in Yazd province, thus should be measures to control and reduce fungal agents in these products.