پديد آورندگان :
جعفري دره در، اميرحسين دانشگاه شهيد باهنر كرمان - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي , محمدآبادي، محمدرضا دانشگاه شهيد باهنر كرمان - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي , اسمعيلي زاده كشكوئيه، علي دانشگاه شهيد باهنر كرمان - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي , رياحي مدوار، علي دانشگاه تحصيلات تكميلي صنعتي و فناوري پيشرفته، كرمان - پژوهشگاه علوم و تكنولوژي پيشرفته و علوم محيطي - پژوهشكده علوم محيطي - گروه بيوتكنولوژي
كليدواژه :
بيان ژن , CIB4 , گوسفند كرماني , Real Time qPCR
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: گوسفند كرماني يكي از مهمترين نژادهاي گوسفند بومي ايران است و به خوبي با شرايط محيطي خشن و نامطلوب قسمت جنوب شرقي كشور كه آب و هواي گرم و خشك غالب است و مراتع كم و كم كيفت هستند سازگار شده است. پروتئين CIB4 يكي از اعضاي خانواده پروتئين‌هاي متصل‌شونده به كلسيم و اينتگرين، يعني CIB مي‌باشد كه در باروري بالا موثر است. ژن CIB4 داراي 2 ترنسكريپت L-CIB4 و S-CIB4 مي‌باشد. تا كنون وظايف بيولوژيكي CIB4 در پستانداران به خوبي مشخص نشده، ولي اخيرا" به دليل اثر بالقوه CIB4 در افزايش باروري توجه زيادي به اين پروتئين شده است. لذا، با توجه به نقش و اهميت اين پروتئين بر باروري، در مطالعه حاضر بيان اين ژن در گوسفند كرماني مورد ارزيابي قرار گرفت.
مواد و روش‌ها: در اين مطالعه بيان ژن CIB4 در بافت‌هاي مغز، قلب، شش، طحال، كليه، كبد، تخمدان و بيضه (از هر بافت 3 تكرار) در گوسفند كرماني (4 نر و 2 ماده) بررسي شد. در ابتدا بافت‌هاي مختلف از گوسفند تهيه و در ازت مايع به آزمايشگاه منتقل شد و سپس RNA كل از تمامي نمونه‌ها طبق دستورالعمل كيت استخراجOne Step RNA Reagent استخراج و cDNA با استفاده از از كيت سنتز cDNA شركت فرمنتاز ساخته شد. پس از تكثير ژن CIB4 و GAPDH به عنوان كنترل داخلي، نتايج منحني‌هاي Real Time qPCR و محصولات PCR با استفاده از الكتروفورز روي ژل آگارز 2 درصد بررسي شد.
نتايج: نتايج اسپكتروفتومتري بيانگر كيفيت مناسب و مطلوب RNAهاي استخراج شده بود و وجود دو باند 18S و 28S در RNA نشان دهنده سالم بودن RNA و عدم وجود باند اضافي نشان دهنده خلوص آن بود. مشاهده تك باند در محدوده bp574 براي براي ژن CIB4 در بافت بيضه و عدم وجود باند bp574 در بافت‌هاي ديگر و وجود باند در محدوده bp150 براي ژن GAPDH در مورد همه نمونه‌ها نشان داد كه ژن CIB4 فقط در بيضه گوسفند كرماني بيان مي‌شود و در بافت‌هاي مغز، قلب، شش، طحال، كليه، كبد و تخمدان بيان نمي‌شود.
نتيجه گيري: با توجه به اين كه ژن CIB4 فقط در بيضه گوسفند كرماني بيان مي‌شود و در بافت‌هاي مغز، قلب، شش، طحال، كليه، كبد و تخمدان بيان نمي‌شود، لذا مي‌توان پيشنهاد كرد كه اين ژن در باروري قوچ‌ها نقش دارد. اگر چه مشخص شد كه اين ژن مختص بيضه است و فقط در بيضه بيان مي‌شود، ولي براي درك مكانيسم‌هايي كه به وسيله آنها بيان اين ژن كنترل مي‌شود بايد مطالعات تكميلي انجام شود.
چكيده لاتين :
Background and objectives: Kermani sheep is one of the most important Iranian native sheep breeds and is well-adapted to harsh environmental conditions of south-eastern part of country, where dry and hot weather is prevalent and pastures are of low quality and quantity. CIB4 protein is one member of the calcium and integrin- binding proteins family, CIB proteins which are effective in high fertility. This protein has two nucleotides’ sequence including L-CIB4 and S-CIB4. CIB4 biological functions in mammals are not well defined yet, however, a lot attentions has been received to these proteins due to their potential effects in increasing fertility. Considering the importance of this protein in fertility, we examined the expression of this gene in Kermani sheep.
Materials and methods: In this study gene expression of CIB4 in brain, heart, lung, kidney, liver, ovary and testis (3 repeats from each tissue) in Kermani sheep (4 males and 2 females) were analyzed. Initially, the various tissues of sheep supplied and in liquid nitrogen, transported to the laboratory and then total RNA from all samples were extracted based on One Step RNA Reagent kit manual and cDNA has been made using cDNA Synthesis Kit of Fermentase Co. After amplifying CIB4 and GAPDH gene, as an internal control, results of Real Time PCR were analyzed and PCR products were separated on 2% agarose gel.
Results: Spectrophotometry results confirmed good quality of extracted RNA and observation of two bands, 28S and 18S on gel electrophoresis of RNA showed that RNA is intact and absence of additional bands represents purity of RNA. Observation of 574 bp fragment for CIB4 gene in testis tissue and absence of this band in other tissues and observation of 150 bp fragments for GAPDH gene in all tissues indicated that this gene is only expressed in testes and in brain, heart, lung, kidney, liver and ovary is not expressed.
Conclusion: According to the results CIB4 gene expressed only in testis tissue of Kermani sheep and in brain, heart, lung, kidney, liver and ovary was not expressed, hence may suggest a role of the gene in ram fertility. Although we indicated that this is a testis-specific gene and express only in the testis, but the mechanisms by what CIB4 expression is regulated need to be elucidated.
