ارزيابي جهش در ژن oprD و مقاومت به ايمي پنم در جدايه هاي سودوموناس آئروژينوسا در استان گيلان

Study on oprD mutation and imipenem resistance in Pseudomonas aeruginosa isolates in Gilan province

سابقه و هدف: سودوموناس آئروژينوسا يك پاتوژن فرصت طلب گرم منفي و يكي از عوامل مرگ و مير عفونت هاي بيمارستاني به خصوص در بيماران با سوختگي هاي شديد مي باشد. يكي از مكانيسم هاي مقاومت دارويي در سودوموناس آئروژينوسا، جهش و يا كاهش بيان ژن oprD مي باشد. اين مطالعه با هدف بررسي جهش هاي ژن oprD در جدايه هاي سودوموناس آئروژينوسا مقاوم به ايمي پنم در استان گيلان انجام شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه مقطعي، تعداد 45 سويه سودوموناس آئروژينوسا از نمونه هاي باليني از بيمارستان ها و آزمايشگاه هاي شهر رشت و لاهيجان جداسازي گرديد. مقاومت و حساسيت سويه ها نسبت به آنتي بيوتيك با روش هاي كربي باوئر (Kirby Bauer) و حداقل غلظت مهار كنندگي (MIC) تعيين گرديد. سپس به منظور ارزيابي جهش در ژن oprD در جدايه هاي مقاوم به ايمي پنم، از روش واكنش زنجيره اي پلي مراز (PCR) و توالي يابي استفاده شد. يافته ها: در اين مطالعه در مجموع 44.4 درصد جدايه ها مقاوم به ايمي پنم بودند. بالاترين ميزان مقاومت در غلظت 512 ميكروگرم در ميلي ليتر ايمي پنم مشاهده گرديد. همچنين توالي يابي نشان داد كه 5 جدايه داراي جهش هاي اشتباه T103S وK115T در ژن oprD بودند. همچنين جهش هاي خاموش L92L در 7 نمونه، S100S در 7 نمونه، P116P در 5 نمونه و G151G در 3 نمونه شناسايي شد. نتيجه گيري: از آنجايي كه oprD در ورود ايمي پنم به سلول نقش دارد، بنابراين ايجاد جهش در اين ژن مي تواند دليل مقاومت جدايه هاي سودوموناس آئروژينوسا نسبت به ايمي پنم باشد. همچنين ممكن است جهش در oprD باعث تغيير تمايل به ايمي پنم در برخي از جدايه ها شود.

Background & Objectives: Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative opportunistic pathogen, and one of the mortality causes of nosocomial infections, specifically in patients with severe burns. One of the drug resistance mechanisms in P. aeruginosa is mutation or down-regulation of oprD gene. In this study, we investigated oprD mutations in imipenem-resistant P. aeruginosa isolates in Gilan province. Materials & Methods: In this sectional study, 45 P. aeruginosa strains were isolated from different clinical samples of Rasht and Lahijan hospitals and laboratories. The antibiotic resistance and susceptibility of the strains were determined by Kirby Bauer and minimum inhibitory concentration (MIC) methods. Then, PCR and sequencing were performed to evaluate oprD mutation in imipenem-resistant isolates. Results: 44.4% isolates were imipenem- resistant. The highest resistance was shown to 512 µg/ml of imipenem. Sequencing analysis showed that 5 isolates have T103S and K115T missense mutations in the oprD gene. Furthermore, silencing mutations including L92L were detected in 7 samples, S100S in 7 samples, P116P in 5 samples, and G151G in 3 samples. Conclusion: Since oprD plays, a major role in imipenem entry to the cell, oprD mutation can be the cause of imipenem resistance in P. aeruginosa isolates. Furthermore, the oprD mutation might have changed the affinity to imipenem in these isolates.