پديد آورندگان :
اطيابي، ناهيد دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي - گروه بيماري هاي داخلي , نيكنام، گلشاد دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي , نصيري، مهدي دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي - گروه بيماري هاي داخلي , طاهري، محمد دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي
كليدواژه :
متالوپروتئينازها , فيبروبلاست , برگ انجير , زايموگرافي , سيتوتوكسيسيتي
چكيده فارسي :
هدف از اين مطالعه، بررسي اثر مهاري عصارهاي برگ انجير (FicllS Cdried) بر فعاليت ماتريكس متالوپروتئينازها و در نتيجه ممانعت از تكثير و متاستاز سلول هاي توموري، در كشت سلولي فيبروبلاست (HEP2) است. به اين منظور، عصاره ي برگ انجير به سه شكل آبي، آبي - الكلي و الكلي تهيه شد. با استفاده از پليت هاي 24 خانه اي كشت سلول حاوي رده ي سلولي فوق، به ترتيب مقادير 5µl عصاره ي آبي (غلظت نهايي 0/5 درصد)، 10µl عصاره ي آبي (غلظت نهايي 1 درصد)، 5µl عصاره ي آبي - الكلي (غلظت نهايي 0/5 درصد)، 10µl عصاره ي آبي - الكلي (غلظت نهايي 1 درصد)، 1µl عصاره ي الكلي (غلظت نهايي 0/1 درصد) و 5µl عصاره ي الكلي (غلظت نهايي 0/5 درصد) اضافه شد. براي هر گوده، يك گوده كنترل، با محتويات مشابه گوده تست اما فاقد عصاره، در نظر گرفته شد. سپس پليت ها در گرمخانه كشت سلول گذاشته شدند و اثرات عصاره پس از گذشت 24، 48 و 72 ساعت، با استفاده از روش رنگ آميزي تريپان بلو براي مشاهده سيتوتوكسيسيتي و روش زايموگرافي ژلاتين براي ديدن باندهاي هضمي، مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج به دست آمده در بررسي با ميكروسكوپ معكوس، نشان داد، عصاره ي الكلي به ميزان 5 و 1 ميكروليتر به ترتيب پس از 24 و 48 ساعت به طور كامل موجب مرگ سلولي گرديد. پس از گذشت 72 ساعت، مقدار 10µl از عصاره ي آبي - الكلي برگ انجير نيز، باعث مرگ سلول ها شد. در بررسي فعاليت آنزيم ها به روش زايموگرافي، در تمامي گوده هاي تست، اثر مهاري عصاره ي برگ انجير بر فعاليت ماتريكس متالوپروتئينازها مشاهده شد. از طرفي در تمامي گوده هاي كنترل باند هضمي ايجاد شده با مقايسه با ماركر استاندارد مورد استفاده، وزن مولكولي MMP9 را نشان مي داد. اين بررسي اثر مهاري عصاره ي برگ انجير بر فعاليت ماتريكس متالو پروتئينازها را تأييد مي كند. از اين رو، توصيه مي شود با استفاده از روش هاي مولكولي در كنار زايموگرافي و انجام مطالعات باليني، به بررسي بيشتر اثر عصاره ي اين گياه بر انواع متالوپروتئينازها به طور جداگانه پرداخته شود.
چكيده لاتين :
The aim of this study was to evaluate the effects of fig leaf extract on the activity of MMPs, in fibroblast (HEP2) cell culture. For this purpose, fig leaf extract was prepared in three forms: 1) aqueous, 2) hydro-alcoholic and 3) alcoholic extracts. Using a 24 wells cell culture plates, six wells of a plate were filled with 5μl aqueous extract, 10μl aqueous extract, 5μl hydro _ alcoholic extract, 10μl hydro_ alcoholic extract, 5μl alcoholic extract, and 1μl alcohlic extract, as test samples, respectively. For each test sample, it was considered a control well, with the same content as test, but without the extracts. Thereafter, the plates were incubated at 37° C and 5%CO2. The effects of different extracts, were investigated after 24, 48 and 72 hours, using an inverted microscope and determination of cell viability and cytotoxicity by trypan blue staining. and zymography test with gelatin for MMPs Activities. The result of the study were as follows: the alcoholic extract at a concentration of 5μl caused cell death after 24 h, and a concentration of 1μl of alcoholic extract, also led to cell death after 48 hours. Hydro_ alcoholic extract caused cell death, at a concentration of 10μl, after 72 hours. In zymography test, it was observed the inhibitory effect of fig leaf extract on the MMPs activities, in all tested doses. However, there were seen enzyme activities in all control tests which showed the same molecular weight bands, 92KD, as was shown in standard marker and belonged to MMP9. The present study, confirmed the inhibitory effect of fig leaf extract on the activity of MMPs in cell cultures. It is recommended to continue this study with molecular methods besides zymography, and clinical observation, using the fig leaf extract and its inhibitory effects on the other kinds of MMPs, separately.
