بررسي مولكولي و پاتوتيپينگ ويروس هاي نيوكاسل جدا شده از پرندگان مهاجر استان بوشهر

Molecular and phathotyping survey of Newcastle virus isolated from migratory birds in Bushehr province

پرندگان مهاجر و آبزي مخازن پاراميكسوويروس ها مي باشند و عامل ايجاد كننده ي بيماري در مرغداري هاي صنعتي نيز محسوب مي گردند، لذا بررسي مولكولي و پاتوتايپينگ ويروس هاي جدا شده از پرندگان مهاجر به منظور پيش گيري از انتقال اين ويروس ضروري مي باشد. نمونه هاي پژوهش حاضر از پرندگان مهاجر تالاب هاي استان بوشهر، در جنوب كشور ايران جمع آوري شده است. جداسازي ويروس و بررسي نمونه هاي جمع آوري شده در موسسه ي تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي شيراز انجام شد. جهت بررسي مولكولي و شاخص هاي بيماري زايي 5 جدايه ي ويروس نيوكاسل، آزمايش هاي ميانگين مدت زمان مرگ جنين جوجه (MDT)، شاخص بيماري زايي داخل مغزي (ICPI) و واكنش زنجيرهاي پلي مراز معكوس (RT_PCR) انجام گرديد. قطعه ي bp362، منطقه ي شكست پروتيين F، با PCR تكثير و تعيين توالي محصول PCR، جهت شناسايي اسيدهاي آمينه و نوكليوتيدها تعيين شد. آناليز فيلوژني ناحيه ي شكست پروتيين F توسط برنامه هاي Blast Bioedit و MegAlign-5 انجام گرديد. بر اساس آزمايش هاي MDT، ICPI، 5 نمونه ي بررسي شده از سويه ي لنتوژن با حدت بيماري زايي ضعيف تشخيص داده شد و همچنين در روش RT-PCR تمامي نمونه هاي مورد مطالعه در منطقه ي اختصاصي bp 362 مثبت شدند. رديف اسيدهاي آمينه در منطقه ي شكست پروتيين F به صورت 112 GRQGRL117 مي باشد كه همه لنتوژن مي باشند. مقايسه ي انجام شده با تعدادي از ويروس ها بانك ژني، نشان داد، بيش ترين شباهت با ويروس هاي لاسوتا و B1 مي باشد. اين تحقيق نشان داد كه پرندگان مهاجر مخصوصاً پرندگان آبزي در منطقه ي بوشهر مي توانند يكي از ناقلين اين ويروس باشند، بنابراين بيماري نيوكاسل هميشه يك خطر براي پرندگان بومي منطقه در مسير پرندگان مهاجر مي باشد.

Migratory birds and waterfowl are know reservoirs of avian paramyxoviruses and it considered cause of the disease in poultry industry, therefore, the survey of pathotyping viruses isolated from migratory birds to prevent transmission is necessary. Samples of present research collected from wetlands of Boushehr province in south of Iran and obtained from Razi Vaccine and Serum Research Institute, Shiraz, Iran. Virus isolation and characterization of the samples were performed at the Razi institute. The biological properties and pathogenicity of five NDV isolated were studied by intracerebral pathogenicity index (ICPI), mean death time (MDT) value and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) methods. The PCR was used to amplify 362bp the cleavage site of all isolates. Sequencing of PCR products was performed to identify nucleotides and deduce amino acids. Aligment and phylogentic analysis of F protein (cleavage site) was performed by software Megaline5, Blast and Bioedit. MDT and ICPI method showed that all of 5 samples were detected as lentogenic strain with low virulent and so, in RT-PCR method all of the samples in the special motif were positive. The deduced amino acid sequence of the cleavage site of the fusion (F) protein confirmed that, all isolates contained the avirulent motif 112 GRQGRL117 at the cleavage site. All isolates have high similarity with LaSota and B1 strain in gene bank. The result in this study showed that migratory birds particularly aquatic birds in Bushehr carries lentogenic NDVs and act as one the reservoirs for the virus. Therefore, ND is always a great risk for the native avian population living on the routes of migratory birds.