بررسي تنوع ژنتيكي و فيتوشيميايي ژرم پلاسم كلپوره استان كرمان با استفاده از نشانگر مولكولي RAPD و روش GC/MS

Investigation of genetic and phytochemical diversity of Teucrium Polium L. germplasm in Kerman province by RAPD molecular marker and GC/MS method

كلپوره (Teucrium polium L.) گیاهیست علفی، پایا و پرشاخه كه در نواحی مختلف اروپا و خاورمیانه ازجمله ایران به‌صورت وحشی می‌روید. برای بررسی تنوع ژنتیكی ژرم‌پلاسم این گیاه در استان كرمان، ابتدا با استفاده از روش CTAB استخراج DNA از 15 نمونه جمع‌آوری شده انجام شد. از 15 آغازگر RAPD برای انجام PCR استفاده شد. داده‌های بدست آمده حاصل از الكتروفورز توسط نرم‌افزار NTSYS با ضریب تشابه دایس و به‌روش UPGMA آنالیز شدند. سپس به‌منظور بررسی تنوع فیتوشیمیایی ژرم‌پلاسم كلپوره از 7 ژنوتیپ از بین نمونه‌های جمع‌آوری شده با استفاده از روش تقطیر با آب توسط دستگاه كلونجر اسانس‌گیری بعمل آمد و با استفاده از دستگاه GC/MS تجزیه و شناسایی اسانس انجام شد. بر روی داده‌های حاصل از نتایج GC/MS توسط نرم‌افزار SPSS تجزیه خوشه‌ای انجام و دندروگرام مربوطه رسم گردید. پس از انجام الكتروفورز محصولات حاصل از PCR پرایمرهای RAPD، 182 باند ایجاد شد كه در محدوده 230 تا 2300 جفت باز قرار داشتند كه از این تعداد، 169 باند (93%) چند شكلی نشان دادند. میزان تشابه ژنتیكی نمونه‌ها بین 0.37 تا 0.72 بود. براساس نتایج تجزیه خوشه‌ای داده‌های مولكولی، نمونه‌های جمع‌آوری شده در چهار گروه قرار گرفتند. مواد موجود در اسانس ژنوتیپ‌های كوهبنان، باغین، شهر بابك، عنبرآباد، راور و كرمان 100% شناسایی شد. در دندروگرام حاصل از تجزیه خوشه‌ای داده‌های فیتوشیمیایی، نمونه‌های مورد نظر در سه گروه طبقه‌بندی شدند.

Teucrium polium L. is an herbaceous, perennial and hyperbranched plant. Teucrium polium grows in different parts of Europe and the Middle East, such as Iran. In order to determination of genetic diversity of Teucrium Polium gemlplasm in Kerman province, 15 genotypes were collected. The DNA was extracted using CTAB method. Fifteen RAPD primers were used for PCR. The electrophoresis results were analyzed using NTSYS software applying UPGMA method with Dice coefficient. To assess the phyto-chemical diversity of Teucrium polium germplasm, the essential oil of seven genotypes of Teucrium Polium was prepared by hydro distillation. The identification and analysis of essential oil composition was done by GC/MS with calculation and study of retention indices and mass spectrometry. Cluster analysis was done for the results of GC/MS by SPSS12 software. After electrophoresis of PCR products, 182 bands were found in the range of 230 to 2300 bp. A number of 169 bands (93%) were polymorphic. The genetic similarity of the genotypes was 0.37 to 0.72. Based on cluster analysis of molecular data, the collected samples were divided into four groups. The essential oil constituents in Kohbanan, Baghin, Shahrbabak, Anbarabad, Ravar and Kerman genotypes were identified. The samples were classified into three groups by cluster analysis of phytochemical data.