پديد آورندگان :
نيكنام گلشاد نويسنده دانشكده ي دامپزشكي، دانشگاه تهران Niknam G , نصيري سيد مهدي نويسنده دانشكده كشاورزي- دانشگاه شيراز , طاهري محمد نويسنده Taheri M
كليدواژه :
سيتوتوكسيسيتي , عصاره ي برگ انجير , زايموگرافي , فيبروبلاست , متالوپروتيينازها
چكيده فارسي :
هدف از اين مطالعه، بررسي اثر مهاري عصاره ي برگ انجير (Ficus Carica) بر فعاليت ماتريكس متالوپروتيينازها و در نتيجه ممانعت از تكثير و متاستاز سلول هاي توموري، در كشت سلول فيبروبلاست (HEP2) است. به اين منظور، عصاره ي برگ انجير به سه شكل آبي، آبي - الكلي و الكلي تهيه شد. با استفاده از پليت هاي 24 خانه اي كشت سلول حاوي رده ي سلولي فوق، به ترتيب مقادير µl 5 عصاره ي آبي (غلظت نهايي 5/0 درصد)، µl 10 عصاره ي آبي (غلظت نهايي 1 درصد)، µl 5 عصاره ي آبي – الكلي (غلظت نهايي 5/0 درصد)، µl 10 عصاره ي آبي – الكلي (غلظت نهايي 1 درصد)، µl 1 عصاره ي الكلي (غلظت نهايي 1/0 درصد) و µl 5 عصاره ي الكلي (غلظت نهايي 5/0 درصد) اضافه شد. براي هر گوده، يك گوده كنترل، با محتويات مشابه گوده تست اما فاقد عصاره، در نظر گرفته شد. سپس پليت ها در گرمخانه كشت سلول گذاشته شدند و اثرات عصاره پس از گذشت 24، 48 و 72 ساعت، با استفاده از روش رنگ آميزي تريپان بلو براي مشاهده سيتوتوكسيسيتي و روش زايموگرافي ژلاتين براي ديدن باندهاي هضمي، مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج به دست آمده در بررسي با ميكروسكوپ معكوس، نشان داد، عصاره ي الكلي به ميزان 5 و 1 ميكروليتر به ترتيب پس از 24 و 48 ساعت به طور كامل موجب مرگ سلولي گرديد. پس از گذشت 72 ساعت، مقدار µl 10 از عصاره ي آبي- الكلي برگ انجير نيز، باعث مرگ سلول ها شد. در بررسي فعاليت آنزيم ها به روش زايموگرافي، در تمامي گوده هاي تست، اثر مهاري عصاره ي برگ انجير بر فعاليت ماتريكس متالوپروتيينازها مشاهده شد. از طرفي در تمامي گوده هاي كنترل باند هضمي ايجاد شده با مقايسه با ماركر استاندارد مورد استفاده، وزن مولكولي MMP9 را نشان مي داد. اين بررسي اثر مهاري عصاره ي برگ انجير بر فعاليت ماتريكس متالوپروتيينازها را تاييد مي كند. از اين رو، توصيه مي شود با استفاده از روش هاي مولكولي در كنار زايموگرافي و انجام مطالعات باليني، به بررسي بيشتر اثر عصاره ي اين گياه بر انواع متالوپروتيينازها به طور جداگانه پرداخته شود.
چكيده لاتين :
The aim of this study was to evaluate the effects of fig leaf extract on the activity of MMPs, in fibroblast (HEP2) cell culture. For this purpose, fig leaf extract was prepared in three forms: 1) aqueous, 2) hydro-alcoholic and 3) alcoholic extracts. Using a 24 wells cell culture plates, six wells of a plate were filled with 5?l aqueous extract, 10?l aqueous extract, 5?l hydro _ alcoholic extract, 10?l hydro_ alcoholic extract, 5?l alcoholic extract, and 1?l alcohlic extract, as test samples, respectively. For each test sample, it was considered a control well, with the same content as test, but without the extracts. Thereafter, the plates were incubated at 37° C and 5%CO2. The effects of different extracts, were investigated after 24, 48 and 72 hours, using an inverted microscope and determination of cell viability and cytotoxicity by trypan blue staining. and zymography test with gelatin for MMPs Activities. The result of the study were as follows: the alcoholic extract at a concentration of 5?l caused cell death after 24 h, and a concentration of 1?l of alcoholic extract, also led to cell death after 48 hours. Hydro_ alcoholic extract caused cell death, at a concentration of 10?l, after 72 hours. In zymography test, it was observed the inhibitory effect of fig leaf extract on the MMPs activities, in all tested doses. However, there were seen enzyme activities in all control tests which showed the same molecular weight bands, 92KD, as was shown in standard marker and belonged to MMP9. The present study, confirmed the inhibitory effect of fig leaf extract on the activity of MMPs in cell cultures. It is recommended to continue this study with molecular methods besides zymography, and clinical observation, using the fig leaf extract and its inhibitory effects on the other kinds of MMPs, separately.
