طراحي پلاسميد يوكاريوتي بيان كننده ي اپي‏توپ G1 از ژن گليكوپروتيين G ويروس تب بي‏ دوام گاوي در سلول‏ هاي جنيني كليه ي انسان

Designing of the expressing eukaryotic plasmid of the G1 epitope of bovine ephemeral fever virus G glycoprotein in human embryonic kidney cells

گليكوپروتيين G ويروس تب‏ بي ‏دوام گاوي (BEFV) به عنوان يك نامزد احتمالي جهت ايمن ‏سازي حيوانات در برابر بيماري تب بي دوام شناخته شده است. در سال‏ هاي اخير، اين پروتيين جهت توليد يك واكسن نوتركيب مورد توجه ويژه‏ بوده است. هدف از مطالعه ي حاضر، ساخت يك پلاسميد يوكاريوتي بيان كننده ي اپي ‏توپ G1 از ژن گليكوپروتيين G ويروس تب‏ بي‏ دوام گاوي، براي استفاده به عنوان يك واكسن DNA احتمالي در مطالعات آينده بود. به اين منظور، اپي ‏توپ G1 از ژن گليكوپروتيين G در ناقل بياني يوكاريوتي pEGFP-N1، تحت كنترل پروموتر سيتومگالوويروس انساني (CMV) كلون شد. سپس سازه ي نوتركيب pEGFPN1-G1 به سلول‏ هاي جنيني كليه ي انسان (HEK 293) انتقال يافت و كارايي بيان پروتيين با استفاده از روش‏ هاي ايمونوفلورسنس غيرمستقيم (IFA) و ايمنوبلات بررسي شد. مشاهده ي فلورسنس درون سيتوپلاسم سلول ‏هاي ترانسفكت شده و ظهور يك باند مجزا با وزن مولكولي تقريبي 26 كيلو دالتون در آزمايش ايمنوبلات در واكنش به يك سرم موش ضد پروتيين G1، نشان‏دهنده ي بيان موفق پروتيين G1 توسط اين سازه ي نوتركيب در سلول‏ هاي ميزبان بود.

The G glycoprotein of bovine ephemeral fever virus (BEFV) has been identified as a plausible candidate for immunization against BEF disease. In recent years, this protein has been investigated to produce a recombinant vaccine. The aim of the present study was to construct a eukaryotic plasmid, expressing the G1 epitope of BEFV G glycoprotein gene, for application as a possible DNA vaccine in future studies. For this purpose, the G1 epitope of G glycoprotein gene was cloned into a eukaryotic expression vector, pEGFP-N1, under the control of the human cytomegalovirus (CMV) promoter. Then, the recombinant pEGFPN1-G1 construct was transfected into the human embryonic kidney (HEK 293) cell line and the expression efficiency was verified by indirect immuno?uorescent (IFA) staining and immunoblotting techniques. Observation of intracytoplasmic ?uorescence in transfected cells and appearance of a distinct band at an approximate molecular weight of 26 kDa in immunoblotting in reaction to an anti-G1 mouse serum indicated that G1 protein was successfully expressed by this recombinant construct in the host cells.