ارزيابي سه رقت آنتي‌ژن E. coli در ايمني‌زايي موش‌هاي نژاد Balb/C

Evaluation of three dilutions of E. coli antigen in immunogenicity in balb/c mice

اي-كولي انتروتوكسيژنيك (ETEC) شايع‌ترين عامل اسهال باكتريايي و مرگ و مير درگوساله‌‌ها است. به علت مقاومت‌هاي آنتي‌بيوتيكي مطالعه بر روي واكسن به عنوان مهم‌ترين راه پيشگيري از اين بيماري مورد توجه است. سه رقت آنتي‌ژن اي-كولي K99 به منظور ايمني‌زايي آن در موش‌هاي نژاد balb/C مورد ارزيابي قرار گرفت. باكتري كشت شده با فرمالين غير فعال و دو بار با PBS شسته شد. رسوب حاصل طبق استاندارد مك فارلند در سه غلظت 107×3 ،1011× 3 و1013×3 واحد تشكيل كلني بر ميلي‌ليتر به ترتيب در گروه‌هاي اول، دوم و سوم تنظيم گرديد. سه گروه 10 تايي موش به عنوان گروه مورد آزمايش دو دز تزريق به فاصله دو هفته به صورت زير پوستي دريافت نمودند. به گروه 10 تايي كنترل نيز تمام محتويات بجز جرم باكتري به همين روش تزريق شد. خون‌گيري ازموش‌ها به مدت ده هفته ادامه يافت و عيار آنتي‌بادي با روش الايزا تعيين شد. تيترسرمي درگروه‌هاي آزمايش از هفته چهارم تا هشتم افزايش و سپس بتدريج كاهش داشت. در حالي‌كه تفاوت در گروه دوم و سوم مشاهده نشد (0/05 < p)، اما بين گروه‌هاي اول و دوم، و اول و سوم افزايش تيتر ملاحظه گرديد (0/05 < p). اگرچه اين ايمني‌زايي ممكن است اختصاصي نباشد اما كامل است، يعني برعليه هر كدام از اپي‌توپ‌هاي آنتي‌ژن باكتري آنتي‌بادي توليد شده است. زماني‌كه جايگاه‌هاي سلول‌هاي ايمني توسط اپي توپ‌هاي آنتي‌ژن پر و سپس اشباع ‌شود، افزايش بيش از حد غلظت آنتي‌ژن تاثير چنداني بر ميزان ايمني‌زايي ندارد.

Enterotoxigenic Escherichia coli (E. coli) (ETEC) is the common cause of bacterial diarrhea and mortality in calves. Due to antibiotic resistant, study on vaccination as the main prevention method is important. In current study, three dilutions of E. coli K99 antigen were evaluated for immunization of balb/C mice. Bacterial culture was inactivated by formaldehyde and washed twice by sterile PBS. Sedimentation products were adjusted in three dilutions of 3 × 107, 3× 1011 and 3× 1013 CUF/m1 due to McFarland standard tubes. Three groups each consisting of 10 mice were set as experimental groups which received two subcutaneous injections doses of different concentrations with two weeks intervals. The control groups (10) received placebo. Mice blood samples were collected during 10 weeks and antibody titer was evaluated by Elisa. Serum titers in all three experimental groups increased from 4th to 8th week and then decreased gradually. No differences were observed between groups two and three, but differences were observed between groups one and two, and one and three. Immunization by whole cell antigen was not specific but was complete. On the other hand; immunization was carried out against each antigenic epitope. When the immune cells sites are occupied by antigenic epitopes and then saturated, excessive concentration of antigen does not have much impact on the immunogenicity.