بررسي استفاده از روش دات-اليزاي سه‌گانه براي تشخيص هم‌زمان ‌نئوسپورا كانينوم، BVD و IBR

Study of using the triple Dot-ELISA for simultaneous diagnosis of Neospora caninum, IBR and BVDV

سه عامل بيماري‌زاي نئوسپورا كانينوم (Neospora caninum)، رينوتراكئيت گاوي (IBR) و اسهال ويروسي گاوي (BVD)، از مهم‌ترين عوامل عفوني بروز سقط جنين در گاو در جهان هستند. جهت تشخيص اين عفونت‌ها از روش اليزا استفاده مي‌شود. هدف از اين مطالعه طراحي تست تشخيصي بود كه قادر به شناسايي راحت و هم‌زمان اين عوامل عفوني باشد. بدين منظور نمونه‌هاي سرم از 184 گاو با سابقه سقط در يك سال گذشته در مناطق شمال فارس جمع‌آوري گرديد سپس نمونه‌ها با استفاده از كيت‌هاي تجاري اليزا و روش اليزاي نقطه‌اي چندگانه ارزيابي گرديد. نتايج بدست آمده از كيت تجاري نشان داد كه ميزان موارد مثبت براي سه عامل عفوني مورد مطالعه به ترتيب 32 درصد براي نئوسپورا كانينوم، 98.2 درصد براي IBR و 64.1 درصد براي BVDV مي‌باشد در حالي كه نتايج مثبت با استفاده از روش اليزاي نقطه‌‌اي براي همين سه مورد به ترتيب 29.3 درصد، 93.5 درصد و 79.3 درصد است. با استفاده از روش آماري كاپا توافق اين دو روش براي تك‌ياخته نئوسپورا كانينوم، ويروس IBR و ويروس BVDV در حد مناسب تا خيلي خوب ارزيابي گرديد. همچنين نتايج آماري مك‌نمار نشان داد كه بين دو روش براي هيچ‌كدام از عوامل مورد نظر در اين پژوهش تفاوت معناداري وجود ندارد. با توجه به نتايج اين مطالعه مشخص شد كه كيت اليزاي نقطه‌اي چندگانه، مي‌تواند به عنوان روشي ساده و مقرون به صرفه جهت تشخيص هم‌زمان سه عامل مهم سقط در گاو مورد استفاده قرار گيرد. اين مطالعه گامي نخست در طراحي يك كيت چندگانه براي تشخيص عوامل عفونتي سقط در گاو براي اولين بار در جهان مي‌باشد و مي‌تواند در آينده با انجام مطالعات تكميلي به عنوان يك كيت تجاري معرفي گردد.

The major agents cause abortion in cattle are Neospora caninum, Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR), and Bovine Viral Diarrhea (BVD). These infection agents cause reproductive disorders which can lead in economic loss in dairy and beef herds. Serological test including ELISA are calculated as the best diagnostic ways for Neospora caninum, IBR, and BVD. The aim of this study was to develop a multiplex Dot-ELISA kit for simultaneous detecting of three abortion agents: Neospora caninum, IBR, and BVD. The blood samples were collected from 184 cows with a history of abortion in the northern of Fars province. Sera were analyzed by Multiplex Dot-ELISA and commercial ELISA kits, and the results were compared to each other. The commercial kit showed 32%, 98,9% and 64.1% positive results for Neospora caninum, IBR, and BVD, respectively. On the other hand, positive results for Multiplex Dot-ELISA showed 29.3%, 93.5% and 79.3% for these agents. Kappa agreement assessment demonstrated that appropriate agreement between multiplex Dot-ELISA results and ELISA kits, and McNemar test showed that both methods have the same efficacy for the identification of these abortion agents. The results of this study revealed that multiple Dot-ELISA kit, could be a simple and economical method for the simultaneous detection of three abortion agents in cattle. This experimentally kit is designed as the first step in designing a multiple kit for the diagnosis of infections in cows which could be introduced with complementary studies as a commercial kit in the future.