جداسازي و شناسايي باكتري‌هاي مولد اگزو پلي ساكاريد بومي خاك‌هاي شور

Isolation and identification of indigenous saline soil exopolysaccharide-producing bacteria

اگزو پلي ساكاريدهاي مترشحه از باكتري­ ها داراي نقش مهمي در مقاومت باكتري­ ها در مقابل تنش­ها از جمله شوري مي­ باشند. اين مطالعه با هدف جداسازي و شناسايي باكتري­هاي شورزي با بيشترين توان توليد اگزو پلي ساكاريد از خاك و بررسي ميزان توليد اگزو پلي ساكاريد در غلظت هاي مختلف نمك انجام گرديد. نمونه ­هاي خاك مورد نظر بر محيط نوترينت آگار داراي 5 % نمك كشت شد. از ميان باكتري­هاي شورزي، كلوني­هاي موكوئيدي با قدرت رشد در حضور بيشترين غلظت نمك به عنوان كلوني مولد اگزو پلي ساكاريد انتخاب و مقدار اگزوپلي ساكاريد توليدي هر كدام از جدايه­ ها در غلظت 5 % نمك تعيين و سويه برتر مورد شناسايي قرار گرفت. ماهيت اگزو پلي ساكاريد سويه برتر با استفاده از تكنيك FTIR و مقدار اگزو پلي ساكاريد توليدي در غلظت­ هاي بالاتر نمك نيز با روش آنترون تعيين گرديد. در طيف مادون قرمز اگزوپلي ساكاريد سويه مورد نظر پيك ­هاي جذبي مربوط به تركيبات كربوهيدراتي از جمله بي گلوكان، همچنين گروه­ هاي الكل، فنول، كربوكسيليك اسيد، كربونيل و آلكين مشاهده شد و توليد اگزوپلي ساكاريد توسط جدايه فوق به طور معني­داري (p<0/05) همراه با افزايش نمك، افزايش يافت. بر اساس نتايج سويه ­اي با توان رشد در محيط 25 % نمك و توليد g/L 0/168 اگزوپلي ساكاريد در مدت 24 ساعت به عنوان سويه برتر انتخاب شد و بر اساس توالي S rDNA 16 به عنوان سيتروباكتر فروندي سويه ATHM38 با شماره دسترسي KX553903 در پايگاه NCBI ثبت گرديد.

Exopolysaccharides secreted by bacteria has an important role in bacterial resistance against stresses such as salinity. This study aimed to isolate and identify halotolerant bacteria with the most exopolysaccharide production potential of the soil and evaluate the production of exopolysaccharides in different salt concentrations. Soil samples were spread on nutrient agar ± %5 NaCl then among the salt tolerant colonies, the most tolerable salt concentration (MTC) of mucoid ones was isolated and the EPS production in the presence of (5%) salt concentrations was assayed. The nature of exopolysaccharide produced by superior strain was identified with FTIR Spectrometer and the exopolysaccharides production in higher concentrations of salt were determined by anthrone-sulfuric acid method. In the infrared spectrum of exopolysaccharide, the absorption peaks were attributed to the presence of carbohydrate compounds such as β-glucans and also to alcohol groups, phenols, carboxylic acids, carbonyl and alkyne. The exopolysaccharide production was significantly (Pvalue < 0.05) increased by increasing salt stress. According to the results, the strain no-7 with growth potential on the 25% salt and producing exopolysaccharides (0.168 g /L) in 24 hours was selected as a superior strain and according to 16S rDNA gene sequencing was identified as Citrobacter freundii ATHM38 and submitted to GenBank under the accession number KX553903.