تشخيص مايكوباكتريوم اويوم پاراتوبركلوزيس در شير پاستوريزه به روش PCR بر اساس جستجوي توالي ژني IS900

Detection of Mycobacterium avium paratuberculosis in pasteurized milk by PCR according to the search of IS900 gene sequence

زمينه: مايكوباكتريوم اويوم پاراتوبركلوزيس باعث التهاب مزمن روده در گاوهاي شيري و در نهايت منجر به بيماري يون مي شود. در مطالعات مختلف، وجود باكتري مذكور در شير تشخيص داده شده و از آن جدا شده است. با توجه به اينكه در طي فرايند دوشش، شير مي تواند با مدفوع دامها آلوده شود، بنابراين ميزان آلودگي شير به شيوه هاي بهداشتي استفاده شده قبل و هنگام دوشش و نيز مراحل آماده سازي و عرضه به بازار مصرف بستگي دارد. لذا هدف از اين مطالعه، تعيين حضور باكتري فوق براي اولين بار در شيرهاي پاستوريزه عرضه شده در استان اردبيل با استفاده از روش PCR بود. روش كار: در مجموع 330 نمونه شير پاستوريزه تجاري از مراكز توليدي مختلف استان اردبيل خريداري شده و 50 ميلي ليتر از هر نمونه جهت استخراج DNA مايكوباكتريوم اويوم پاراتوبركلوزيس سانتريفيوژ شده و استفاده گرديد. DNA استخراج شده براي بررسي حضور باكتري مذكور در نمونه ها بر اساس جستجوي توالي اختصاصيIS900 در ژنوم اين باكتري به كمك دو نوع پروتكل PCR مورد استفاده قرار گرفت. يافته ها: وجود DNA مايكوباكتريوم اويوم پاراتوبركلوزيس در33 مورد (10% نمونه ها) با استفاده از آغازگرهاي F90 وF91 ، در22 مورد (6.66% نمونه ها) با استفاده از آغازگرهاي FP25 و RP26 و در 11 مورد ((3.33% نمونه ها) هم با هر دو جفت آغازگر تشخيص داده شد. نتيجه گيري: نتايج حاصله از اين مطالعه نشان داد كه شيوع نسبتا بالايي از آلودگي به باكتري مذكور در شير پاستوريزه وجود دارد. با توجه به اينكه باكتري مذكور به عنوان علت احتمالي در توسعه بيماري كرون انسان (نوعي بيماري التهابي روده) نيز مطرح مي باشد، به نظر مي رسد كه اين يافته يك نگراني جدي در مورد سلامت عمومي است.

Background: Mycobacterium avium subsp paratuberculosis (M.a.p) causes chronic intestinal inflammation in dairy cattle and eventually leads to Johne's disease. In some studies، mentioned bacteria has been detected and isolated from milk. As regards، during the milking process; milk could get contaminated with chattels feces،therefore the extent of contamination of milk depends on hygienic methods prior and during of milking and the preparation and delivery to the consumer market processes too.So،the aim of this study was determined the prevalence of mentioned bacteria in pasteurized milk in Ardebil province by PCR method for the first time. Methods: In total; 330 commercially pasteurized milk samples were purchased from various production centers of Ardebil province and 50ml from each sample were centrifuged for M.a.p DNA extraction. Extracted DNA was evaluated for the presence of M.a.p's specific sequence of IS900 by two protocol of PCR assay. Results: M.a.p DNA was detected in 33cases (10% of samples) by assay with F90،F91 primers، 22 cases (6.66% of samples) by assay with FP25، RP26 primers and 11 cases (3.33% of samples) by assay with both pairs primers. Conclusions: The results obtained from this study; demonstrate a relatively high occurrence of M.a.p in pasteurized milk. In addition، regarding the possible etiological role of M.a.p in the development of Crohn’s diseases (Infectious Bowel Disease)، it is considered as a serious concern for public health.