بررسي بيان ژن‌هاي اختصاصي كارديوميوسيت‌هاي اوليه در اجسام جنيني سيستم قلبي-عروقي

مقدمه و هدف: سلول‌هاي بنيادي جنيني انساني (hESC) در محيط آزمايشگاهي مي‌توانند به كارديوميوسيت هاي ضربان دار تبديل‌شده و مدلي را به وجود آورند كه بتوان مراحل اوليه تكاملي اين سيستم را بررسي نمود. زماني كه اين سلول‌ها از لايه مغذي خود جدا مي‌شوند، hESC ها اجسام جنيني (EB) را به وجود مي‌آورند كه پس از كشت، نواحي از سلول‌هاي ضربان دار را به وجود مي‌آورند. هدف از انجام اين تحقيق، بررسي و مطالعه زمان بيان ژن‌هاي قلبي در طي ايجاد قلب است. مواد و روش‌ها: پس از كشت سلول‌هاي بنيادي، استخـراج mRNA كارديوميوسيت هاي اوليه در زمان‌هاي مختلف پس از تمايز انجام شد. بيان ژن‌هاي اختصاصي كارديوميوسيت ها به نام OCT-4, CD-34، Brachyury، Alpha-cardiac actin، FLK1 (Vegfr-2/KDR)، ANF، MLC-2a? و MLC-2v در EB انساني (hEB) از طريق RT-PCR موردبررسي قرار گرفت. نتايج: بيان ژن‌هاي CD-34 و Brachyury در EB از روز 21 افزايش مي‌يابد. بيان ژن OCT-4 در EB 5 روزه مشاهده شد. بيان ژن Alpha-cardiac actin از روز 10 افزايش مي‌يابد. بيان ژن FLK1 (Vegfr-2/KDR) براي اولين بار در EB 10 روزه مشاهده گرديد و در روز 14 به‌شدت افزايش يافت. افزايش بيان ژن MLC-2a و MLC-2v از روز 20 و ژن ANF از روز 45 در EB مشاهده گرديد. نتيجه‌گيري: سلول‌هاي بنيادي جنيني انساني ابزاري مفيد جهت بررسي تكامل و عملكرد سيستم قلبي- عروقي هستند.

Background and Objective: Human embryonic stem cells (hESCs) can differentiate in vitro into spontaneously contracting cardiomyocytes and produce a model to investigate the early developmental stages of this system. After removing of cells from their feeder layer, hESCs create embryoid bodies (EB). Plating of EB results in developing areas of beating cells. In the present study, cardiomyocyte gene expression time-points during heart development was investigated. Materials and Methods: After stem cell culture, cardiomyocyte’s mRNA was extracted in different time-points after differentiation. The expression pattern of candidate genes CD-34, OCT-4, Brachyury, Alpha-cardiac actin, FLK1 (Vegfr-2/KDR), ANF, MLC-2a, and MLC-2v was analyzed in human EB (hEB) by RT-PCR. Results: There was an enhanced expression of CD-34 from day 21 in EB in suspension. The OCT-4 gene expression was in 5-day-old EB and Brachyury expression was significantly increased by day 21. There was an enhanced expression of as Alpha-cardiac actin from day 10 in EB in suspension. The FLK1 (Vegfr-2/KDR) gene expression was first specified in 4-day-old EB and was significantly increased by day 14. There was an enhanced expression of MLC-2a and MLC-2v from day 20 and ANF by day 45 in EB in suspension. Conclusion: hESCs might be useful as an effective model system for understanding the developmental processes and functioning of the human heart.