تعيين جنسيت جنين گاو نژاد هلشتاين به كمك روش غير تهاجمي DNA با منشأ جنيني شناور در پلاسما گاو آبستن

Fetal sex determination in Holstein cow using non-invasive technique Cell-free fetal DNA (cffDNA) in plasma derived from pregnant cows.

دستيابي به روش دقيق، آسان و اقتصادي پيش‌انتخاب جنسيت جنين در صنعت گاو شيرده داراي اهميت خاصي ميباشد. اخيراً DNA با منشأ جنيني شناور در پلاسما و سرم مادر آبستن سوبستراي خوبي براي تعيين جنسيت جنين در اوايل دوره آبستني پيشنهاد شده است. بدين منظور، تعداد 16 گاو هلشتاين با دوره آبستني بعد هشت هفتگي، 4 گاو هلشتاين غيرآبستن و دو گاو نر(كنترل منفي) انتخاب و پلاسماي آنها براي استخراج ccfDNA تفكيك گرديد. آغازگرهاي اين مطالعه بر اساس ژن DEAD box protein مستقر در هر دو كروموزوم X و Y طراحي و سنتز گرديد. واكنش زنجيره پلي‌مراز با استفاده از روشهاي استاندارد موجود بهينه‌سازي شد. نتايج الگوهاي الكتروفورزي محصولات حاصل از تكثير بر روي ژل متافور آگارز شش درصد وجود دو باند در جنين نر و يك باند در جنين ماده را نشان داد. رديابي جنسيت جنين‌هاي تحت آزمايش پس از تولد، مطابقت نتايج مولكولي با جنسيت گوساله‌ها پيش از تولد را تأييد كرد. شايد به‌توان از اين روش در بررسي‌هاي مديريتي تخمين تليسه جايگزين در گله و يا كنترل فروش گاوهاي هلشتاين آبستن مازاد استفاده كرد.

Discovery of accurate, easy and economic embryo sex determination in the dairy cattle industry assumed highly particular importance. cffDNA is novel potential material to determine the sex of the fetus in early gestation period has not imposed negative effect on embryo health. In this regard, in overall, 16 Holstein cows experiencing eight weeks of gestation and 4 non-pregnant Holstein cows, two bulls (negative control) were chosen as candidates for this present experiment and subsequently that plasma was separated to extract ccfDNA. Qiagene commercial kit was used to extract. DEAD box protein gene-based primers for this study based on both chromosomes X and Y and past articles were selected and were synthesized reported. Polymerase reaction and the required conditions were optimized using proposed standard. The results of electrophoresis PCR patterns male fetus’s two bands and one band of fema le fetuses showed. Monitoring of birth of each gender embryos under the test after the birth of calves showed complete match the molecular results re-confirmed.