همسانه سازي و بيان ژن پروتيين غشاي خارجي 31 (Omp 31) باكتري بروسلا ملي تنسيس Rev1

Cloning and expression of outer membrane protein 31 (Omp31) Brucella melitensis Rev1

بيماري بروسلوز به عنوان يك بيماري مشترك بين انسان و دام به واسطه ي تكثير باكتري بروسلا در داخل سلول هاي پستانداران اتفاق مي افتد. Omp31 يكي از پروتيين هاي غشاي خارجي اين باكتري مي باشد كه به واسطه ي نقش مهمي كه در تحريك سلول هاي CD8+T و CD4+T دارد مي تواند سبب مهار بيماري بروسلوز گردد. در اين بررسي ژن Omp31 به عنوان يكي از ژن هاي موثر در بيماري بروسلا مورد بررسي مولكولي از نظر آناليز فيلوژني و همچنين مستعد بودن پروتيين نوتركيب اين ژن جهت طراحي واكسن بر عليه بيماري بروسلوز مورد مطالعه قرار گرفته است. از آغازگرهاي اختصاصي به منظور تكثير DNA مستخرج از باكتري بروسلا مليتنسيس سويه Rev1 و تاييد مراحل مطالعه استفاده گرديد. جهت تكثير اين ژن از وكتور كلونينگ pMB57R/T و جهت بيان از وكتور pET32a كه داراي ساختار trx جهت افزايش بيان مي باشد استفاده گرديد. پس از تكثير قطعه ي bp 723، قطعه ي مورد نظر به روش TA كلونينگ درون وكتور كلونينگ منتقل و به روش شوك حرارتي وارد ميزبان كلونينگ گرديد. سپس نمونه ي تاييد شده به درون وكتور بياني ساب كلون گرديد. القا بيان با IPTG صورت گرفت و آناليز پروتيين‌هاي توليد شده با ژل نشان دهنده ي بيان موفقيت آميز پروتيين نوتركيب مي باشد. نتايج مفيد حاصل از اين مطالعه بيان گر اين است كه اين آنتي ژن مي تواند به عنوان يه كانديد مناسب در پژوهش هاي آتي به منظور طراحي واكسن نوتركيب بر عليه بيماري بروسلا استفاده گردد.

Brucellosis is a well-known infection among domestic animals caused by Brucella bacterium. Omp31 is outer membrane proteins that play important role in simulate CD4+ T and CD8+ T cells. In current study, cloning, expression and also phylogenic analysis of Omp31 gene as a candidate for designing subunit vaccine against Brucella was investigated. Amplifying was performed using specific primers. Cloning of this gene was performed using pMB57R/T vector in TOP10F`strain of E.coli. Also, pET32a vector used for expression. Omp31 gene with 723 bp was amplified successfully. It , then, was coloned using TA cloning approach within cloning vector. Expression of this gene has done in pET32a vector by inducing IPTG. Results confirmed with sequencing and SDS-PAGE. According to this result, we can propose this gene as a candidate for designing subunit vaccine against Brucella in future study.