تمايز اشريشيا كلي و شيگلا از ساير انتروباكترياسه ها با استفاده از تكثير ژن lamB

Identification and differentiation of E. coli and Shigella from other Enterobacteriaceae sp. by lamB gene amplification

سابقه و هدف: وجود جلاي فلزي و تخمير لاكتوز براي شناسايي و تمايز اشريشيا كلي از ساير انتروباكترياسه‌ها سال‌هاست كه در آزمايشگاه‌ها مورد استفاده قرار مي گيرد. اما اين روش‌ها اشكالاتي را نيز در تشخيص دقيق اشريشيا كلي به همراه دارد. در اين مطالعه براي اولين بار در ايران با استفاده از تكنيك PCR به بررسي ژن lamB به منظور تمايز اشريشيا كلي و شيگلا از ساير اعضاي انتروباكترياسه جدا شده از نمونه‌هاي باليني و آب‌هاي سطحي شهر بابل پرداخته است. مواد و روش‌ها: در اين پژوهش به صورت مقطعي- توصيفي بر روي100 نمونه باليني جدا شده بيماران مراجعه كننده به مراكز درماني و 30 نمونه آب‌هاي سطحي شهر بابل انجام شد. تمامي نمونه‌ها بر روي محيط‌هاي ائوزين متيلن بلو و بلاد آگار كشت داده شدند. كلني‌هاي رشد كرده با انجام تست‌هاي بيوشيميايي شناسايي گشتند. سپس DNA نمونه‌ها استخراج و ژن lamB با استفاده از روش PCR تكثير گرديد. يافته‌ ها: تمامي 130 نمونه كشت داده شده بر روي محيط‌هاي بلاد آگار و ائوزين متيلن بلو رشد كردند. در اين پژوهش تمامي سويه هاي اشريشيا كلي ( 40 مورد) و شيگلاي( 30 مورد) مورد پژوهش به ميزان 100% ژن lamB را داشتند. اما در هيچ يك از باكتري‌هاي سالمونلا و كلبسيلا (هر كدام 30 مورد) ژن ياد شده وجود نداشت.. نتيجه گيري:. نتايج اين پژوهش نشان داد كه پايش ژن lamb يك روش مناسب براي جداسازي اوليه اشريشيا ‌كلي و شيگلا از ساير اعضاي انتروباكترياسه مي باشد.

Background and Objective: Metallic green sheen and lactose fermentation has been used for identification and differentiation of E. coli from other Enterobacteriaceae in laboratories for many years. However, these methods defect to accurate diagnosis of E. coli. This study employed lamB gene PCR amplification to distinguish E. coli and Shigella from other Enterobacteriaceae isolated from clinical samples and surface waters, collected in Babol, Iran. Material and Methods: In this cross-sectional study, 100 clinical samples from patients attending health centers and 30 surface water samples were gathered in Babol. All samples were grown on blood agar and Eosin methylene blue. After first biochemical identification, DNA of the samples were extracted and lamB gene was amplified using the PCR reaction. Results: After cultivation of the samples on blood agar and eosin methylene blue media and biochemical identification of the strains, it has been shown that all 40 isolated E. coli and 30 Shigella carry the lamB gene. However, none of the Salmonella and Klebsiella strains showed the related band. Conclusions: According to the findings of this study, investigation of lamB gene is an appropriate method for initial isolation of E. coli and Shigella from other Enterobacteriaceae.