بررسي جهش هاي شايع ژن KRAS در بيماران مبتلا به سرطان كلوركتال تك گير در استان خوزستان

Analysis of common mutations of KRAS gene in patients suffering from sporadic colorectal cancer in Khuzestan

سرطان كلوركتال (CRC) يكي از بدخيمي هاي شايع در جهان است. جهش هاي KRAS يكي از وقايع اوليه در تكوين و پيشرفت CRC مي باشند. كدونهاي 12 و 13 از اگزون شماره 1، نقاط داغ جهش در اين ژن هستند. در اين بررسي فراواني وقوع جهش هاي كدون 12 و 13 در بيماران خوزستانيِ مبتلا به سرطان كلوركتال تك گير (SCRC) تعيين گرديد و با ميزان آن در ساير نواحي ايران و نيز در ديگر كشورها مقايسه شد. DNA ژنومي از بافتهاي توموري 45 بيمار خوزستاني مبتلا به SCRC استخراج شد. جهش هاي نقطه اي در اين دو كدون با روش PCR/RFLP و سپس غني سازي جهش، شناسايي گرديد. جهش ها با توالي يابي به روش Sanger تاييد شدند. 13/33 درصد تومورها در كدونهاي 12 و 13 ژن KRAS جهش داشتند. اين فراواني با اغلبِ فراوانيهاي به دست آمده در ديگر كشورها (33-53 درصد) و نيز فراوانيهاي به دست آمده در ساير نقاط ايران (20.3 و 28 درصد) تفاوت دارد كه مي تواند براساس دلايل متعددي از جمله بالا بودن احتمالي وضعيت ناپايداري ميكروستلايتي در آنها، حساسيت ناكافي روش غربالگري، فاكتورهاي ژنتيكي و محيطي متفاوت از جمله رژيم غذايي سرشاز از امگا-3 در اين جمعيت باشد. همچنين با استفاده از روش غني سازي فركانس آللهاي شناسايي شده در گروه مورد بررسي دو برابر گشت.

Colorectal cancer (CRC) is one of the most common malignancies in the world (rate of death: 33%). Codons 12 and 13 of exon 1 are the hot spots for occurrence of mutations in KRAS. This study is aims to define the occurrence of KRAS mutations at codon 12 and 13 in patients from Khuzestan suffering from sporadic colorectal cancer (SCRC) and compare them with patients from other regions of Iran and other countries. Genomic DNA was first extracted from 45 SCRC specimens. KRAS point mutations were genotyped by PCR-RFLP analysis followed by enrichment PCR. Enrichment PCR is an appropriate method which we use for detecting even lower percentage of heterozygous mutations in one specimen. Finally Sanger sequencing was used to confirm mutations identified 13.33% of tumor samples showed mutations at codon 12 or 13 of the KRAS gene. It’s totally different with the frequency of those from many of other countries (33-53%) and alternative studies in Iran (20.3% and 28%); that could be because of various reasons such as less role of serrated pathway in development of CRC among Khuzestani population, probable microsatellite instability-high status of these tumors, insufficient sensitivity of RFLP method, different genetic and environmental factors like high intake of omega-3 fat in the Khuzestani ususal diet. Also, use of enrichment method, doubled the frequency of mutations identified in this cohort.