مقايسه بيان دو ژن مرجع GAPDH و EF1α در كدو (Cucurbita pepo L.) تحت پيش تيمار اسپرمين و تنش شوري

Comparison of two reference genes (GAPDH and EF1α) expression in medicinal pumpkin plant (Cucurbita pepo L.) during spermine pretreatment and salt stress

يكي از اولين اثرات تنش هاي مختلف، تغيير در بيان ژن هاي مربوط مي باشد. بنابراين مطالعه بيان ژن براي بررسي اثر تنش داراي اهميت ويژه است. بررسي بيان يك ژن نياز به اندازه گيري دقيق و تجديد پذير ميزان mRNA به صورت كمي يا نيمه كمي دارد. براي بهينه سازي (نرمال كردن) داده ها، انتخاب ژن هاي كنترل دروني (مرجع يا خانه دار) مناسب، كه بيان آن ها در طول تيمار نوسان نداشته باشند، اهميت دارد. ژن هاي GAPDH و EF1α در بسياري مطالعات بعنوان ژن هاي مرجع استفاده مي شوند. در اين پژوهش بيان اين دو ژن تحت پيش تيمار اسپرمين (صفر و 0/1 ميلي مولار) و شوري (صفر و 80 ميلي مولار سديم كلريد) و پايداري بيان آنها در بافت برگ و ريشه گياه كدو مورد بررسي قرار گرفت. بررسي بيان ژن هاي مرجع نشان داد كه بيان ژن GAPDH در دو اندام متفاوت است و تحت تنش شوري و كاربرد اسپرمين نيز تغيير مي نمايد اما بيان EF1? نسبت به GAPDH در برگ و ريشه از پايداري بيشتري برخوردار است. بنابراين، نتايج پيشنهاد مي كنند كه ژنGAPDH نقش مهمي در مقاومت به تنش شوري در كدو ايفا مي كند. همچنين استفاده از ژن مرجع EF1α در بهينه سازي بيان ژن را در كدو تحت تنش شوري پيشنهاد مي كند.

One of the first effects of various stresses, is related Changes in gene expression. So, study of the effect of stress on gene expression is of special importance. The analysis of gene expression requires precise, and reproducible measurements for quantitative or semi-quantitative mRNA level. For normalization of the data, the selection of suitable internal control (reference or housekeeping) genes, whose expression do not fluctuate during treatments is important. The GAPDH and EF1α genes are used as reference genes in many studies. In this study, the expression of two reference genes under spermine (0 and 0.1 mM) pretreatment, salinity (0 and 80 mM NaCl), and the stability of their expression in leaves and roots of pumpkin were investigated. Study of the reference genes expression showed that, the expression of GAPDH gene varied in both different organs and under salinity stress and spm application, but EF1α gene has more stable expression than GAPDH gene in the roots and leaves. Therefore, the results of this study suggests that GAPDH plays an important role in salt stress tolerance in pumpkin, and also EF1α, can be used as suitable reference gene for normalization of gene expression analysis in pumpkin under salinity stress.