مقايسه اثر عصاره زنجبيل و آسپيرين بر بيان ژن COX-2 در سلول هاي دودمان سرطان كولون HT-29

Compare the effect of ginger extract and aspirin on COX-2 gene expression in colon cancer cell line HT-29

مقدمه و هدف: سرطان كولون پس از سرطان ريه دومين علل مرگ و مير ناشى از سرطان در جهان مي باشد. عوامل محيطي و ژنتيكي نقش مهمي در بروز اين سرطان ايفا مي كنند. از عوامل مهم در ايجاد اين سرطان التهابات طولاني مدت كولون مي باشد. زنجبيل به دليل داشتن تركيب 6-جينجرول داراي خاصيت ضد التهابي است كه در پيشگيري از سرطان كولون نقش دارد.در سرطان كولون التهاب، از علائم اوليه آن محسوب مي شود. در اين مطالعه ­اثر عصاره زنجبيل­ بر بيان ژن -2­­COX در سلول­ هاي دودمان سرطان كولون HT-29 بررسي شد. روش تحقيق: در اين مطالعه، سلول ­هاي دودمان سرطان كولون 29- HT پس از كشت، ­در پاساژ سوم تريپسينه شد و تعداد 5000 سلول در چاهك­­­ هاي پليت 96 خانه كشت داده شد .سپس سلول ­ها با عصاره زنجبيل در 4 غلظت10، 20، 30 و40ميلي ­گرم برميلي­ ليتر تيمار داده و پليت­ ها به مدت 24، 48 و 72 ساعت در دماي 37 درجه سانتي­ گراد، 5 درصد CO2 انكوبه گرديد. به منظور بررسي تاثير عصاره زنجبيل بر سلول­ ها،تست MTT انجام و دانسيته نوري پليت­ ها توسط دستگاه الايزا در طول موج 570 نانومتر قرائت شد. RNA توتال سلولي استخراج و توسط روش RT-PCR بيان ژنCOX-2 بررسي گرديد. نتايج و بحث: عصاره زنجبيل با غلظت 20 ميلي گرم برميلي­ ليتر بيشترين IC50 را نشان داد. بيان ژن COX-2 با روش RT-PCR نشان داد، عصاره زنجبيل با غلظت 20 ميلي گرم بر ميلي ليتر موجب كاهش بيان ژن COX-2 در مقايسه با داروي آسپرين به عنوان يك داروي ضد التهاب درسلول ­هاي دودمانHT-29 سرطان كولون مي­ شود.با توجه به اهميت كاهش التهاب در بيماران مبتلا به سرطان كولون يافته­ ها نشان داد كه استفاده از عصاره زنجبيل مي­ تواند نقش مهمي در كاهش التهاب و كاهش بيان ژن COX-2 كه نقش مهمي در سنتز پروستاگلاندين­ ها و ايجاد التهاب دارد داشته باشد. توصيه كاربردي/ صنعتي:دراين بررسي نقش عصاره زنجبيل و آسپيرين كه از داروهاي ضدالتهاب موثر است قابل مقايسه بوده است. لذا به نظر مي رسد با تحقيقات بيشتر در آينده، بتوان از آن به عنوان يك راهكار جديد درماني بهره برد.

Background and aim: Colon cancer is the third most prevalent cancer in Iran. Prolonged colon inflammation is an important factor, in the development of colon cancer. Ginger has anti-inflammatory properties due to its content of [6]-gingerol and hence can play a role in the prevention of colon cancer. In this research the effects of ginger extract on reducing expression of the Cox-2 gene in HT-29 cells was studied in colon cancer. Methodology: In this laboratory research, HT-29 cells of colon cancer were and the cells were trypsinated at the third passage and 5000 of them were cultured in the wells of 96-well plates. Ginger extract at four concentrations (10, 20, 30, and 40 mg/mL) was added to the wells, and the plates were incubated at 37˚C for 24, 48, and 72 hours in a 5% Co2 atmosphere. To study the effects of ginger extract on the cells, the MTT test was performed and the densities of the plates were read using an ELISA instrument. Total cellular RNA was extracted and expression of the COX-2 gene was investigated using the RT-PCR method. Results and Discussion: The measured IC50 concentration of the ginger extract was 20 mg/ml. Determination of the expression of the COX-2 gene using the RT-PCR method indicated that the ginger extract at 20 mg/ml reduced expression of the COX-2 gene compared to using Aspirin. Therefore, ginger extract could be used as an anti-inflammatory drug against the HT-29 cells of colon cancer. Reduction of inflammation is important in patients with colon cancer, and results of this research indicated use of ginger extract could play an important role in decreasing inflammation and in reducing the expression of the COX-2 gene, which has a significant role in the synthesis of prostaglandins and in causing inflammation.