پديد آورندگان :
عربستاني، محمدرضا داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻫﻤﺪان - داﻧﺸﮑﺪه ﭘﺰﺷﮑﯽ - ﮔﺮوه ﻣﯿﮑﺮوب ﺷﻨﺎﺳﯽ، ايران , طهماسبي، حامد داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ زاﻫﺪان - داﻧﺸﮑﺪه ﭘﺰﺷﮑﯽ، ايران , زيني، بهروز داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ زاﻫﺪان - داﻧﺸﮑﺪه ﭘﺰﺷﮑﯽ، ايران
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: انتروكوكوس ها مي توانند سبب آلوده شدن فرآورده اي غذايي شوند. هدف از اين پژوهش، جداسازي گونه هاي مختلف انتروكوكوس بر اساس روش Curve Analyzing Melting مبتني بر Real time PCR در نمونه هاي مواد غذايي مي باشد.
مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، 138 نمونه مختلف (گوشت مرغ، گوشت قرمز، شير، پنير) آلوده به گونه هاي مختلف انتروكوك از مجموع 510 نمونه مورد بررسي از سطح شهر جمع آوري شد. شناسايي گونه هاي مختلف انتروكوكوس با هدف قرار دادن سايت هاي انحصاري در گونه هاي مختلف و طراحي پرايمرهاي اختصاصي براي اين نواحي بر اساس روشCurve Analizing Melting مبتني بر Real time PCR صورت گرفت.
يافته ها: بر اساس آناليز منحني هاي ذوب به روش Real Time PCR، 84 ايزوله (60/86 درصد) انتروكوكوس فكاليس، 48 ايزوله (34/78 درصد) انتروكوكوس فاسيوم، 1 ايزوله (0/7 درصد) انتروكوكوس گاليناروم، 4 ايزوله (2/8 درصد) انتروكوكوس آويوم و 1 ايزوله (0/7 درصد) به عنوان انتروكوكوس كاسلي فلاووس شناسايي شدند. بيش ترين فراواني ايزوله هاي انتروكوك به دست آمده مربوط به نمونه هاي گوشت مرغ با 29 نمونه (24/63 درصد) و گوشت قرمز با 21 نمونه (51/44 درصد) بود. هم چنين با قرار دادن نتايج حاصل از تعيين توالي آزمون PCR به عنوان شاخص استاندارد، حساسيت و ويژگي روش فنوتيپي براي انتروكوكوس فكاليس به ترتيب 78/94 درصد و 90/74 درصد، براي انتروكوكوس فاسيوم 89/13 درصد و 97/77 درصد، براي انتروكوكوس گاليناروم 50 درصد و 98/52 درصد، براي انتروكوكوس آويوم 66/66 درصد و 98/52 درصد و براي انتروكوكوس كاسلي فلاووس 50 درصد و 98/56 درصد به دست آمد. ارتباط معني داري بين نوع نمونه و پراكنش گونه هاي انتروكوكوس مشاهده شد (0/05≤p).
استنتاج: باتوجه به گستردگي و خطاپذير بودن روشهاي فنوتيپي در تعيين گونه انتروكوكوس ها ، و حسايت و ويژگي پايين اين روش، استفاده از يك روش حساس و سريع الزامي است.
چكيده لاتين :
Background and purpose: Enterococci as a group of bacteria infecting raw foods and dairy
products can contaminate different food products. The purpose of this study was to isolate strains of
enterococci based on the Real time PCR method using melting curve analysis in food samples.
Materials and methods: In this experimental study, 510 samples were collected from which
138 different samples (chicken, meat, milk, and cheese) containing different strains of enterococci were
investigated. Then, identification of Enterococcus species was performed by targeting specific sites and
specific primers were designed according to Real time PCR-based melting curve analysis.
Results: Based on melting curve analysis by Real Time PCR, the Enterococcus species identified
were as follows: E.faecalis in 84 isolates (60.86%), E.faecium in 48 (34.78%), E.gallinarum in 1 (0.7%),
E.avium in 4 (2.8%), and E.Caselli flavus in 1 isolate (0.7%). The most frequent isolates were detected in
29 samples of chicken meat (51.44%) and red meat (n= 21, 24.63%). Considering the results of
sequencing as a Gold a standard test, the sensitivity and specificity of phenotypic methods for E.faecalis,
E.faecium, E.gallinarum, E.avium, and E.Caselli flavus were 94.78% and 90.74%, 89.13 % and 97.77 %,
50% and 98.52%, 66.66% and 98.52%, and 50% and 98.56%, respectively. A significant relationship was
observed between the sample and distribution of Enterococcus species (P≤0.05).
Conclusion: Due to extensive viability error in identification of Enterococcus species isolated
from food by phenotypic methods, using a rapid and sensitive method is necessary.
