ﺷﻨﺎﺳﺎيي اكسترموفيل‌هاي ﺗﻮﻟﯿﺪﮐﻨﻨﺪه آﻧﺰيم ﻫﺎي ﺿﺪﺳﺮﻃﺎن ال- ﮔﻠﻮﺗﺎﻣﯿﻨﺎز و ال- آسپاراژيناز ازﭼﺸﻤﻪ آﺑﮕﺮم لاريجان

Identification of extermophilies producing l- glutaminase and l-asparaginase from Larijanhotspring

سابقه و هدف: فراوان­ ترين منابع براي به ­دست آوردن آنزيم­ ها با قابليت پايداري بيش­تر، باكتري­ هاي ترموفيل هستند. در سال­هاي اخير ال- آسپاراژيناز ميكروبي به­ طور گسترده­ اي در درمان سرطان­ هاي انساني مورد استفاده قرار گرفته است. امروزه به­ دليل كاربرد زياد ال-گلوتاميناز در صنعت پزشكي از آن در درمان لوسمي حاد لنفوبلاستي و بيماري ايدز استفاده مي­ گردد. هدف مطالعه حاضر، غربالگري سويه­ هاي ترموفيل جديد با قابليت توليد آنزيم­ هاي ال- گلوتاميناز وال- آسپاراژيناز بود. مواد و روش­ ها: چشمه آبگرم لاريجان به­ عنوان محل جداسازي باكتري­هاي ترموفيل انتخاب شد. كشت و تست­ هاي مورفولوژيكي و بيوشيميايي، انجام شد. تمام سويه­ هاي باكتريايي به­ منظور بررسي فعاليت آنزيمي ال- آسپاراژيناز و ال- گلوتاميناز به ­وسيله روش (RPA) غربالگري شدند. محيط M9 اصلاح شده حاوي ال- آسپاراژين و ال- گلوتامين و فنل رد به­ عنوان معرف استفاده شدند. سويه هاي باكتريايي به­ وسيله تعيين سكانس ژن6RrRNA بعد از PCR شناسايي شدند. يافته­ ها: در مجموع 6 سويه ترموفيل از چشمه آبگرم لاريجان جداسازي شدن aد كه متعلق­به گونه باسيلوس ليكني فورميس بودند. فعاليت ال- آسپاراژيناز در سويه ­هاي LT-1,LT-2, LT-3, LT-4 ,LT -5 مشاهده شد. فعاليت ال-گلوتامينازي به­ وسيله باسيلوس ليكنيفورميس سويه­ هايLT-1, LT-3, LT-5,LT-6 توليد شد. سه سويه ترموفيل LT-1,LT-3,LT-5باقابليت توليد آنزيم ال- آسپاراژيناز وال- گلوتاميناز با موفقيت جداسازي شدند. نتيجه­ گيري: چشمه آبگرم لاريجان يكي از منابع با پتانسيل بالاي محصول­ هاي مفيد ميكروبي است كه مي ­تواند به­ عنوان يك منبع مفيد محصول­ هاي متعدد بيولوژيكي همانند آنزيم ­ها مورد استفاده قرار گيرد.

Background and Objective: The most frequently used sources of more stable enzymes are thermophilic bacteria. In recent years microbial L-asparaginase has been widely used as therapeutic agent in the treatment of human cancers. Microbial L-glutaminase is currently used in the treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL) and human immunodeficiency virus (HIV) because of its potential applications in medicine . The aim of present study was to screen new potent thermophilic bacterial isolates producing L-asparaginase and L-glutaminase. Methods: Larijan hotspring was chosen as the location for isolation of the thermophilic bacteria. Culture and morphological and biochemical tests, were performed. All the bacterial isolates were screened in ortherto L-asparaginase and L-glutaminase enzyme activity using Rapid Plate assay method. M9 modified media incorporated L-asparaginase or L-glutaminase and phenol red as indicator were used. Thermophilic strains were later identified by 16SrRNA gene ribotyping followed by PCR . Results: A total of six isolates recovered from Larijan hotspring were found to belong to Bacillus licheniformis. The L-asparaginase activity was observed in LT-1, LT-2, LT-3, LT-4, LT-5 strains.The L-glutaminase produced by Bacillus licheniformis LT-1, LT-3, LT-5 and LT-6 strains. Three thermophilic LT-1, LT-3, LT-5 strains with L-glutaminase and L-asparaginase activity have been successfully isolated. Conclusion: Larijan hot spring is one of the potential sources of useful microbial products that can be used as a source of useful different biological products like enzymes.